[发明专利]真菌(1-3)-β-D葡聚糖比色检测试剂盒的制备及其使用方法

权利要求书

1.真菌(1-3)-β-D葡聚糖比色检测试剂盒的制备及其使用方法，以人工合成显色基质Boc-Val-leu-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)、Boc-leu-Gly-Arg-DIAN或Boc-Thr-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)，利用微量(1-3)-β-D葡聚糖特异性地激活东方鲎血细胞裂解物中含有的G因子、凝固酶原及凝固蛋白原，从而诱发东方鲎血细胞裂解物凝固化反应.被激活的凝固酶水解合成显色基质释放出显色基团DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)，DIAN与显色剂A(1-萘酚-4-磺酸钠、1-萘酚-2-磺酸钠或1-萘酚-5-磺酸钠)在高碘酸钠显色剂B的存在下生成蓝色缩合物，在630-680nm波长处，酶原激活量与形成的缩合物的吸收度在一定范围内呈线形关系，从而定量检测出样品中(1-3)-β-D葡聚糖浓度；试验过程应严格按照使用说明书上具体操作方法进行操作，同时要注意一些操作过程中的注意事项；该试剂盒可以用来早期诊断临床深部真菌感染，作为临床诊断的参考之一。

2.如权利要求1所述的人工合成显色基质包括Boc-Val-leu-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)、Boc-leu-Gly-Arg-DIAN及Boc-Thr-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)三种。

3.如权利要求1所述的显色剂A包括1-萘酚-4-磺酸钠、1-萘酚-2-磺酸钠及1-萘酚-5-磺酸钠以及显色剂B(高碘酸钠)等。

4.如权利要求1所述的所生成的蓝色缩合物，在630-680nm波长处，酶原激活量与形成的缩合物的吸收度在一定范围内呈线形关系。

5.如权利要求2所述的人工合成显色基质的浓度为2-6mMol之间，配制后分装冷冻干燥或溶液在2-8℃避光保存，Boc-Val-leu-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)核磁图见说明书附图3。

6.如权利要求3所述的显色剂1-萘酚-4-磺酸钠、1-萘酚-2-磺酸钠及1-萘酚-5-磺酸钠的浓度为0.6-6mMol之间，并使用0.05Mol硼酸缓冲液配制(pH 8.5)，其显色剂高碘酸钠的浓度为0.2-2％之间，使用灭菌注射用水配制，分装在棕色瓶中冷冻干燥或溶液在2-8℃避光保存。

7.如权利要求1所述的试剂盒具体操作方法为：将反应主剂掰开，加入反应主剂用溶解液0.1ml，轻轻混匀溶解，分别加入标准品稀释系列、阴性对照及待测样品各0.1ml，37℃保温60分钟；之后分别加入0.1ml合成显色基质，37℃保温15分钟；取出振摇均匀，然后加入显色剂A 50ul混匀，之后加入0.1ml显色剂B混匀，室温放置5分钟，最后在波长630-680nm检测吸光度值，计算含量。

8.如权利要求1所述的试剂盒使用过程中注意外环境的影响以及所使用器具中含有的(1-3)-β-D-Glucan的污染，会对测定值产生影响；尤其是显色试剂添加前操作一定要避免微生物以及(1-3)-β-D-Glucan的污染，另外以(1-3)-β-D-Glucan为成分的一些药品、纤维素类透析膜进行血液透析时，也都会对测定值产生影响。