[发明专利]叶酸受体靶向型纳米金颗粒的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及纳米金颗粒，特别涉及叶酸受体靶向型纳米金颗粒的合成方法。

背景技术

近年来，生物大分子越来越多地被作为还原剂用于制备纳米金颗粒(纳米金颗粒可简写为GNPs)，包括糖、蛋白、核酸等均有报道。生物大分子制备出的纳米金颗粒具备生物功能化的特点，易于与生物应用相结合，其制备过程通常是无毒的。Wang等([1]Li G P，Li D，ZhangL X，Zhai J F，Wang E K，One-Step Synthesis of Folic Acid Protected Gold Nanoparticles and TheirReceptor-Mediated Intracellular Uptake[J]Chem.Eur.J.，2009，15：9868-9873)报道了一种在温和条件下，以叶酸为还原剂制备纳米金颗粒，并且证实制备出的纳米金颗粒对叶酸受体高表达的细胞具有靶向性。这种方法虽然具备合成条件较为温和，制备的纳米金生物相容性较好等优点，但是颗粒的形貌不够规整，粒径不够均一，制备用时较长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种叶酸受体靶向型纳米金颗粒的合成方法，叶酸受体靶向型纳米金颗粒可简写为FA-GNPs。

本发明包括以下步骤：

1)往HAuCl₄溶液中加入叶酸溶液，混匀后再加入NaOH溶液，得溶液A；

2)将溶液A进行微波反应，反应结束后冷却，透析除去未反应的小分子，即得叶酸受体靶向型纳米金颗粒。

在步骤1)中，所述HAuCl₄、叶酸与NaOH的质量比可为100∶(6～10)∶(80～120)；所述HAuCl₄溶液的摩尔浓度可为0.8～1.2mmol/L，最好为1mmol/L；所述NaOH溶液的摩尔浓度可为6～10mmol/L，最好为8mmol/L；所述叶酸溶液的摩尔浓度可为0.1～0.3mmol/L，最好为0.2mmol/L。

在步骤2)中，所述微波反应的条件可为：将溶液A密封，反应温度为100～120℃，反应时间为90～150min，搅拌速度为1000～1200r/min；所述透析的时间可为12～16h。

本发明直接以叶酸为还原剂，利用微波法快速制备出粒径均匀、分散性较好的叶酸受体靶向型纳米金颗粒。通过透射电子显微镜和紫外可见分光光度计，以及采用动态光散射、傅立叶红外光谱、X射线光电子能谱和X射线衍射(XRD)等手段对FA-GNPs进行表征，通过WST-1细胞毒性实验分析FA-GNPs的细胞相容性，利用电感耦合等离子质谱(ICP-MS)测定HeLa细胞对FA-GNPs的摄取量，证实，合成的的FA-GNPs能够特异性地识别表面有高水平叶酸受体表达的肿瘤细胞，具有良好的靶向性。表明其具有良好的细胞相容性，并且能够特异性地识别表面有高水平叶酸受体表达的细胞，在肿瘤细胞检测中具有广泛的应用。

本发明与传统纳米金颗粒的合成方法相比，具有以下优势：

1)所合成的叶酸受体靶向型纳米金颗粒表面包裹一层叶酸，可增强金纳米颗粒的稳定性。

2)所合成的叶酸受体靶向型纳米金颗粒具备良好的细胞相容性。

3)所合成的叶酸受体靶向型纳米金颗粒具有良好的细胞靶向性，可用于癌细胞的检测等。

附图说明

图1为FA-GNPs的紫外吸收光谱图。在图1中，横坐标为波长(nm)，纵坐标为吸光度；紫外光谱检测结果表明其最大吸收峰在529nm。

图2为FA-GNPs的透射电镜图。在图2中，标尺为20nm。

图3为FA-GNPs和叶酸的红外光谱图。在图3中，横坐标为波数(cm^-1)，纵坐标为透光率(％)；曲线a为FA-GNPs的红外光谱图，曲线b为叶酸的红外光谱图。

图4为FA-GNPs的Au 4f的X射线光谱图。在图4中，横坐标为结合能(eV)，纵坐标为脉冲计数；结合能在80～90eV代表Au 4f的信号峰；Au 4f5/2和Au 4f7/2的结合能在87.5eV and84.0eV，这是由于Au所决定的，说明叶酸成功的将HAuCl4中的Au³⁺还原为Au⁰。