[发明专利]一种检测尖孢镰刀菌的PCR方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201010567807.5 | 申请日： | 2010-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN101974650A | 公开（公告）日： | 2011-02-16 |
| 发明（设计）人： | 李园;曹坳程;郭美霞;崔瑞;吴篆芳;赵海滨 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 胡敬红 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 镰刀 pcr 方法 试剂盒 | ||
1.一种检测尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的PCR方法，包括如下步骤：
(1)配制PCR反应体系，
(2)在配制好的PCR反应体系中加入待测模板，
(3)进行PCR扩增反应；
其特征在于，所述PCR反应体系中的引物的序列信息如下：
Fo1：5’-CGTCATTTCAACCCTCAAGCA-3’
Fo2：5’-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAT-3’。
2.根据权利要求1所述的PCR方法，所述PCR反应体系为：10×PCR buffer 2μL，15mM MgCl20.5μL，2.5mM dNTPs 1.6μL，5μM引物各0.5μL，Taq酶1U，DNA模板1μL，其余为灭菌双蒸水，终体积为20μL。
3.根据权利要求2所述的PCR方法，所述PCR扩增反应的程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，65℃退火1min，72℃延伸1min，共30个循环；最后72℃延伸10min。
4.根据权利要求1所述的PCR方法，所述PCR为荧光定量PCR。
5.根据权利要求4所述的PCR方法，所述PCR反应体系为：
反应总体积为20μL，SYBR Green Supermix 10μL，10μM/L的Fo11μL，10μM/L的Fo21μL，模板11μL，余量为无菌双蒸水。
6.根据权利要求5所述的荧光定量PCR方法，所述PCR扩增反应的程序如下：
第一步：95.00℃3分钟，1个循环；
第二步：：95.0℃45秒，65.0℃45秒，55.0℃1分钟，45个循环；
第三步：55.0℃10分钟，95.0℃1分钟，1个循环
第四步：55.0℃1分钟
第五步：55.0℃10秒，80个循环。
7.一种检测尖孢镰刀菌的PCR试剂盒，其特征在于包含有具有如下序列信息的引物：
Fo1：5’-CGTCATTTCAACCCTCAAGCA-3’
Fo2：5’-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAT-3’。
8.根据权利要求7所述的PCR试剂盒，还包括荧光定量PCR所需的荧光染料。
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