[发明专利]一种用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片，其特征在于，该蛋白芯片包括芯片、真菌毒素人工抗原、抗真菌毒素单克隆抗体、荧光标记二抗，真菌毒素人工抗原按照微阵列点在固相载体上。

2.如权利要求1所述的用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片，其特征在于，所述抗真菌毒素单克隆抗体用稀释液稀释为浓度0.3-0.9μg/ml。

3.如权利要求1所述的用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片，其特征在于，所述稀释液为0.01mol的PBS溶液，其PH为7.4。

4.如权利要求1所述的用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片，其特征在于，所述固相载体上所要点制的所述真菌毒素人工抗原溶于CBS缓冲液中，然后用芯片自动点样系统将这些蛋白质点样在固相载体上，点样密度为16点/cm²，点样量为50nl/点。

5.如权利要求1所述的用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片，其特征在于，所述固相载体为表面醛基化的玻片。

6.一种上述蛋白芯片的制备方法，其特征在于，该方法具体为：

1)利用芯片点样仪将缓冲液稀释的抗原液和空白稀释液按微阵列点于芯片上；

2)点样干燥后的芯片置于BSA溶液中封闭，之后用PBST清洗；

3)选定其中设定个数微矩阵，在每个微矩阵中分别加入PBS溶液稀释的桔青霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马菌素B1标准品混合液，另外的亚微阵列中，各加入提前处理好的饲料阴性样品稀释液和分别添加不同浓度的三种真菌毒素样品混合稀释液；将抗桔青霉素抗体、抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体、抗伏马菌素B1抗体用PBS进行稀释，并将抗体稀释混合液加入到每个亚芯片中进行反应；

4)将荧光标记的二抗加入芯片的每个亚矩阵中进行避光孵育，之后用PBST避光清洗；

5)芯片荧光扫描仪读取信号，采用PerkinElmer荧光扫描显微镜对采集图象进行数据处理，以结合率为纵坐标、桔青霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马菌素标准品浓度为横坐标，采用RIDAWIN软件分别绘制竞争抑制曲线，利用所得回归方程计算三种真菌毒素结合率为50％时的浓度；

6)根据竞争抑制曲线计算样品中真菌毒素的含量：将测得样品的荧光值代入竞争抑制曲线即的样品中的添加浓度或样品中所含真菌毒素的含量。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中缓冲液稀释为0.05mol PH9.6的CBS缓冲液稀释，所述芯片上共设置有12个微矩阵，每个微矩阵点16个点，点样量为50nl/点，常温过夜固定；其中前三排分别为桔青霉素抗原、脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗原、伏马菌素B1抗原，最后一排为空白稀释液。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中BSA溶液浓度为3％，在BSA溶液中封闭时间为30min，PBST溶液浓度为0.1％，用其洗三次，每次5min。

9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中所述抗桔青霉素抗体、抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体、抗伏马菌素B1抗体用0.01mol PH7.4的PBS进行稀释，并取25μL抗体稀释混合液加入到每个亚芯片中，37℃反应30min，并用0.01mol PH7.4PBST洗液冲洗3次，每次5min。

10.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中的二抗用0.01mol、PH7.4的PBS稀释。