[发明专利]一种用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物芯片技术领域，主要涉及一种用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片及其制备方法。 

背景技术

我国是农产品生产和消费大国，农产品中真菌素素的检测直接关系到我国农产品生产、出口和居民食品消费安全。真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，通常存在于霉变的谷物中，一旦通过食物链进入人体后，将可能造成致畸、致突变和致癌等严重危害，由于真菌的寄生和真菌毒素的产生，严重影响农作物的产量，降低农产品和饲料品质，造成巨大经济损失。因此在全球食品安全问题中备受关注。目前，食品安全问题已成为国家关注的重点内容之一，并连续启动了无公害农产品及食品中各种有害物质的快速检测技术及产品成为一项重要的需求。 

生物芯片技术迅速成为目前生命科学研究领域发展最快的技术之一。生物芯片有两种主要类型：基因芯片和蛋白芯片。蛋白质芯片(proteinchip)是继基因芯片之后又一对人类健康具有重大应用价值的生物芯片。蛋白质芯片由固定于不同支持介质上的抗原或抗体微阵列组成，阵列中固定分子的位置及组成是已知的，用标记(荧光物质、酶或化学发光物质等)的抗体或抗原与芯片上的探针进行反应，然后通过特定的扫描装置进行检测，结果由计算机分析处理。蛋白质芯片的应用领域包括蛋白质表达的检测；蛋白质一蛋白质、蛋白质一DNA和蛋白质一小分子等之间相互作用的鉴定；抗体的鉴定。这种新技术使得研究人员可以在一次实验中比较生物样品中成百上千的蛋白质的相对丰度。蛋白质芯片与传统的研究方法相比其优越性主要体现在高通量、高灵敏度和高准确性。现有的蛋白芯片主要应用于医学领域，在农产品检验领域的应用研究尚处于空白状态。 

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于解决现有技术所用的蛋白芯片存在特异性弱、灵敏度低、应用范围窄、操作复杂的缺点，提 供一种结构简单、操作方便、价格便宜、检测分析过程连续化、集成化、微型化、高通量的用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片；本发明的另一目的是提供一种上述蛋白芯片的制备方法。 

为实现上述目的，本发明一种用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片，包括芯片、真菌毒素人工抗原、抗真菌毒素单克隆抗体、荧光标记二抗，其中，真菌毒素人工抗原按照微阵列点在固相载体上。 

进一步，所述抗真菌毒素单克隆抗体用稀释液稀释为浓度0.3-0.9μg/ml。 

进一步，所述稀释液为0.01mol的PBS溶液，其PH为7.4。 

进一步，所述固相载体上所要点制的所述真菌毒素人工抗原溶于CBS缓冲液中，然后用芯片自动点样系统将这些蛋白质点样在固相载体上，点样密度为16点/cm²，点样量为50nl/点。 

进一步，所述固相载体为表面醛基化的玻片。 

一种上述蛋白芯片的制备方法，具体为： 

1)利用芯片点样仪将缓冲液稀释的抗原液和空白稀释液按微阵列点于芯片上； 

2)点样干燥后的芯片置于BSA溶液中封闭，之后用PBST清洗； 

3)选定其中设定个数微矩阵，在每个微矩阵中分别加入PBS溶液稀释的桔青霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马菌素B1标准品混合液，另外的亚微阵列中，各加入提前处理好的饲料阴性样品稀释液和分别添加不同浓度的三种真菌毒素样品混合稀释液；将抗桔青霉素抗体、抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体、抗伏马菌素B1抗体用PBS进行稀释，并将抗体稀释混合液加入到每个亚芯片中进行反应； 

4)将荧光标记的二抗加入芯片的每个亚矩阵中进行避光孵育，之后用PBST避光清洗； 

5)芯片荧光扫描仪读取信号，采用PerkinElmer荧光扫描显微镜对采集图象进行数据处理，以结合率为纵坐标、桔青霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马菌素标准品浓度为横坐标，采用RIDAWIN软件分别绘制竞争抑制曲线，利用所得回归方程计算三种真菌毒素结合率为50％时的浓度； 

6)根据竞争抑制曲线计算样品中真菌毒素的含量：将测得样品的荧光值代入竞争抑制曲线即的样品中的添加浓度或样品中所 含真菌毒素的含量。 

进一步，所述步骤1)中缓冲液稀释为0.05mol PH9.6的CBS缓冲液稀释，所述芯片上共设置有12个微矩阵，每个微矩阵点16个点，点样量为50nl/点，常温过夜固定；其中前三排分别为桔青霉素抗原、脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗原、伏马菌素B1抗原，最后一排为空白稀释液。