[发明专利]一种光合细菌的计数方法

说明书

技术领域

本发明涉及实验操作方法领域，具体涉及一种光合细菌的计数方法。

背景技术

光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PBS）是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称。由于它具有能利用有机小分子作为碳源的生理特性，且菌体本身又无毒无害、营养丰富的特点,因之在水产养殖、废水处理等行业中得到了广泛应用,并在新能源开发、种植业、食品、化妆品、医药保健等行业显示出广阔的应用前景。一些种属的光合细菌在一定的培养条件下产生粘性物质，随着培养时间的延长粘性物质增多，如：荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌，但是沼泽红假单胞菌的培养液不具备粘性特征，这就为不同菌的计数方法提出了针对性要求。

光合细菌数的测定一直是产品质量控制的关键指标，目前光合细菌菌数常用的测定方法有显微镜计数法（血球计数板）法，稀释平板法，双层平板法，MPN（最大或然数法），比浊计数法等进行光合细菌菌数的测定。这些方法在实际生产中普遍存在操作复杂、培养时间长、结果重复性差等问题。如：血球计数板计数法，虽然操作简单，但是不适用于光合细菌因光合细菌的菌体小，一般1~1.3μm×2~4μm，血球计数板较厚，很难对光合细菌进行计数，血球计数板一般多用于酵母菌的计数，酵母菌的大小一般为2.5~10μm×4.5~21μm；稀释平板在光合细菌技术上面应用的不多，只有个别在黑暗、需氧的情况下代谢能力旺盛的菌才适用，大部分光合细菌的生长是需要厌氧、光照的，在进行厌氧、光照培养过程中平板培养时间长，且有水珠产生，容易污染；双层平板计数法解决了厌氧的问题，但是培养的菌往往较小、颜色淡，甚至无色，且生长的周期长，MPN方法准确，且是行标推荐使用的方法，但是技术操作繁琐，时间周期长，一般需要12~15天才能判断出结果，且在进行粘性光合细菌计数时，结果差异较大，不适用于生产过程质量的监控；比浊法是大多数无粘性物质光合细菌常用的计数方法，但是培养基等会对结果产生一定的影响。

发明内容

本发明的目的在于根据现有的光合细菌在计数时存在的计数时间长、结果差异较大等问题，提供一种检测结果准确的光合细菌的快速计数方法。

本发明目的通过以下技术方案予以实现：

一种光合细菌的计数方法，包括如下步骤：

（1）配制染色液；

（2）菌液的稀释：取光合细菌1~2ml，无菌水稀释；

（3）细菌计数板的清洗：将细菌计数板和盖玻片在75%酒精中浸泡3~5min，取出后用无菌滤纸吸取多余的酒精，备用；

（4）玻片的制备：吸取光合细菌悬液，加至细菌计数板的计数区，滴加染色液，盖上盖玻片；

（5）计数。

作为一种优选方案，步骤（1）中所述染色液包括结晶紫1~2.0g、草酸铵0.5~0.8g、酒精20ml和蒸馏水80ml。

更进一步地，所述染色液包括结晶紫2.0g，草酸铵0.8g，95%酒精20ml，蒸馏水80ml。

作为一种优选方案，本发明所述染色液的配制方法是：先将结晶紫溶于酒精，草酸铵溶于蒸馏水中，然后将两种溶液混合，过滤，静置，静置时间优选为48h。

作为一种优选方案，步骤（2）中所述无菌水稀释是先用无菌水进行1:100稀释，稀释后漩涡震荡30~60s，再取稀释液进行1:10稀释。

作为一种优选方案，步骤（4）中所述将粘性光合细菌悬液加至细菌计数板的计数区后，每个计数格的细菌数为5~10个。

作为一种优选方案，步骤（4）中，所述滴加染色液是在细菌计数板的计数区滴加3μL的染色液。

作为一种优选方案，所述光合细菌为粘性光合细菌。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明方法所用时间短，利用改良的细菌计数板计数，添加了染色液，可以很清晰地在显微镜下直接观察细菌，一般15min左右完成一个样品计数，增加了计数的灵敏度，减少误差，重复性好，非常适合大规模生产中应用，本方法与MPN（最大或然数）方法进行了计数结果对比，差异不明显。本方法步骤简单，操作方便，对实验室条件要求不高，是一种简单、快捷的光合细菌技术方法。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。