[发明专利]采用单一聚合物相系统的分离方法

权利要求书

1.从水性液体分离至少一种目标生物分子或化合物的方法，所述方法包括：

a.在容器中混合所述水性液体与热致感应型亲水聚合物，和如果必要时至少一种加入的盐；

b.在聚合物高于其浊点的条件下轻柔地混合得自(a)的液体混合物，以形成一聚合物两相系统，其中所述目标生物分子或化合物分配进入其中一相，并且优选该相不富集聚合物，而非目标化合物和颗粒不同程度地分配至相界面或聚合物富集相；和任选地，

c.通过与新的互补相混合使含目标物的相进行另一分配；

d.将目标生物分子从其所富集的相回收；和任选地；

e.从聚合物富集相将聚合物再循环回到分配单元操作。

2.分离一种或更多种目标生物分子或化合物的多步骤方法，其中通过权利要求1的方法对发酵物或类似的含生物质的进料进行澄清。

3.权利要求1的方法，其中所述聚合物为包含环氧乙烷作为其主要成分之一的聚醚，并且呈现在4-100℃之间的浊点。

4.权利要求3的方法，其中所述聚合物的分子量在900-100000Da范围内。

5.权利要求1的方法，其中热致感应型聚合物选自聚乙二醇(PEG)；包括Breox的环氧乙烷环氧丙烷(EOPO)共聚物，或包括EOPOEO嵌段共聚物Pluronic^TM的EOPO嵌段共聚物；或者乙氧基或其它氧基改性的多糖包括乙基羟乙基纤维素(EHEC)。

6.权利要求1的方法，其中聚合物在水溶液中自缔合的趋势主要不是热致感应的而是pH致感应的。

7.权利要求1的方法，其中加入盐的浓度在1-500mM范围内，优选在100-300mM范围内。

8.权利要求1的方法，其中所述盐选自NaCl、Na₂PO₄、KPO₄、NaSO₄、柠檬酸钾、柠檬酸钠、(NH₄)₂SO₄和乙酸钠；或其任意组合。

9.权利要求1的方法，其中总的聚合物含量构成约4-20％(w/w)。

10.权利要求1的方法，其中所述两相系统为包含约4-20％EOPO的水性聚合物两相系统。

11.权利要求1的方法，其中所述两相系统为包含约5-15％EOPO的水性聚合物两相系统。

12.权利要求1的方法，其中在步骤(a)中pH约为中性。

13.权利要求1的方法，其中所述液体为发酵液。

14.权利要求1的方法，其中所述目标生物分子或化合物为蛋白质。

15.权利要求1的方法，其中所述目标生物分子或化合物为抗体。

16.权利要求1的方法，其中所述目标生物分子或化合物为多克隆抗体、单克隆抗体或抗体片段如Fab片段。

17.权利要求1的方法，其中所述目标生物分子或化合物由不富集聚合物的相分离。

18.权利要求1的方法，其中所述两相在显示优先分配于一相或另一相的疏水物或其它亲和性配体存在下形成，其中所述亲和性配体任选地为被聚合物改性的。

19.权利要求13的方法，其中所述容器为在其中进行了发酵的容器。

20.权利要求1的方法，其中所述混合和相形成在塑料袋中进行，所述塑料袋任选地连接至运动平台如摇动平台。

21.权利要求1的方法，所述方法进一步包括至少一个液相色谱法步骤。

22.权利要求21的方法，其中所述液相色谱法包括基于蛋白质A的亲和色谱法。

23.权利要求21的方法，其中所述液相色谱法之后进行一个或更多个步骤，所述一个或更多个步骤包括亲和色谱法、离子交换、疏水作用色谱法或多模式离子交换色谱法。

24.从液体分离至少一种抗体的方法，所述方法包括在两相系统的相之间分配的步骤，所述两相系统包含亲水性聚醚和至少一种盐。