[发明专利]用于人多潜能干(hPS)细胞的生长和分化的3D培养系统

权利要求书

1.用于获得肝细胞样细胞的方法，所述方法包括

i)在生物反应器中接种hPS或肝前体细胞；

ii)用一种或多种培养基灌注生物反应器，进行10至50天的时间段，以获得肝细胞样细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述肝细胞样细胞以包含肝细胞样细胞的肝组织样3D结构的形式存在。

3.权利要求1或2的方法，其中所述hPS细胞是人胚胎干细胞。

4.权利要求1或2的方法，其中所述hPS细胞是诱导的多潜能干(iPS)细胞。

5.权利要求1或2的方法，其中所述肝细胞前体细胞是定型内胚层(DE)。

6.权利要求1或2的方法，其中所述肝细胞前体细胞不是定型内胚层(DE)。

7.权利要求1或2的方法，其中所述肝细胞前体细胞具有胎儿内胚层的特征。

8.权利要求1或2的方法，其中所述肝细胞前体细胞具有肝内胚层的特征。

9.前述权利要求的任一项的方法，其中所述生物反应器是中空纤维毛细管生物反应器。

10.前述权利要求的任一项的方法，其中所述生物反应器提供有膜区室。

11.权利要求10的方法，其中所述膜区室包括两个或更多个毛细管系统以及一个或多个中空纤维膜。

12.权利要求9至11的任一项的方法，其中所述生物反应器包括用于灌注培养基通过毛细管系统的工具和用于在毛细管系统中进行气体交换的工具。

13.权利要求9至12的任一项的方法，其中生长培养基的灌注通过毛细管系统发生，并且气体交换通过中空纤维膜系统发生。

14.权利要求9至13的任一项的方法，其中所述毛细管系统和一个或多个中空纤维膜经配置形成整合在室中的独立的交织的纤维毛细管膜系统。

15.前述权利要求的任一项的方法，其中在步骤i)中接种hPS细胞，并且按照下列方案进行灌注：

条件是，包括步骤2-6中的至少3个步骤。

16.权利要求15的方法，其中包括所有步骤。

17.权利要求15或16的任一项的方法，其中培养基DM-A包含生长培养基和一种或多种如下成分：激活蛋白A、bFGF、Glutamax-I。

18.权利要求15-17的任一项的方法，其中所述培养基DM-A包含激活蛋白-A和bFGF。

19.权利要求15-18的任一项的方法，其中所述培养基DM-B包含生长培养基例如RPMI Advanced培养基等，和一种或多种如下成分：激活蛋白A、bFGF、GLutamax-I、FCS。

20.权利要求15-19的任一项的方法，其中所述培养基DM-B包含激活蛋白-A和bFGF。

21.权利要求15-20的任一项的方法，其中培养基DM-C包含生长培养基例如RPMI Advanced培养基等，和一种或多种如下成分：bFGF、aFGF、BMP2、BMP4、Glutamax-I、FCS。

22.权利要求21的方法，其中所述培养基DM-C包含bFGF、aFGF、BMP2、BMP4。

23.权利要求15-22的任一项的方法，其中培养基DM-D包含肝培养基例如Williams培养基E等，和一种或多种如下成分：BSA、抗坏血酸、Glutamax-I、D-半乳糖/D-山梨醇、氢化可的松、胰岛素、转铁蛋白、bFGF、EGF、HGF。

24.权利要求23的方法，其中所述培养基DM-D包含BSA、抗坏血酸、D-半乳糖/D-山梨醇、氢化可的松、胰岛素、转铁蛋白、bFGF、EGF、HGF。