[发明专利]产生GH8木聚糖酶变体的方法

权利要求书

1.一种产生亲本GH8木聚糖酶多肽的变体的方法，所述方法包括下述步骤：

a)提供编码成熟亲本GH8木聚糖酶多肽的多核苷酸，所述多肽包含第一保守GH8木聚糖酶基序：

[ST]E[GAS]X[GAS][YFW]    (SEQ ID NO:1)，

b)将至少一个突变导入编码多核苷酸，由此将至少一个改变在第一保守GH8木聚糖酶基序N端侧侧翼的20个氨基酸位置中的一个或多个处导入编码的多肽，和

c)将突变的多核苷酸在合适宿主细胞中并在有助于产生变体的条件下进行表达，

其中所述变体具有木聚糖酶活性。

2.权利要求1的方法，其中所述成熟亲本GH8木聚糖酶多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与选自SEQ ID NO:3至SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:159中任一所示的GH8木聚糖酶的组中的GH8木聚糖酶的成熟部分至少60%相同。

3.权利要求1或2的方法，其中所述成熟亲本GH8木聚糖酶包含第二保守GH8木聚糖酶基序：

[ND][AS]X[RLPQ]    (SEQ ID NO:155)。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述成熟亲本GH8木聚糖酶包含或组成为SEQ ID NO:3的氨基酸28至433。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述编码的多肽中的至少一个改变包括在第一保守GH8木聚糖酶基序N端侧侧翼的20个氨基酸位置中的一个或多个处的一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或插入。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中所述编码多肽中的至少一个改变包括在第一保守GH8木聚糖酶基序N端侧侧翼的15个氨基酸位置中的一个或多个处的一个或多个氨基酸的插入；优选一个或多个丙氨酸的插入。

7.权利要求1-6任一项的方法，其中所述变体当以充足量在混合之前或混合过程中加入生面团时，具有至少一种面包改善特性。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述变体当以充足量在混合之前或混合过程中加入生面团时，能够增加烘烤产品的面包体积或增加烘烤产品表面上切痕的宽度。

9.权利要求7或8任一项的方法，其中所述变体当以充足量在混合之前或混合过程中加入生面团时，与亲本GH8木聚糖酶相比，提供粘性较低的生面团。

10.一种亲本GH8木聚糖酶多肽的分离的变体，所述多肽包含第一保守GH8木聚糖酶基序：

[ST]E[GAS]X[GAS][YFW]    (SEQ ID NO:1),

其中所述变体与亲本相比在第一保守GH8基序N端侧侧翼的20个氨基酸位置中的一个或多个处包含至少一个氨基酸改变，且其中所述变体具有木聚糖酶活性。

11.权利要求10的变体，选自下述的变体组：

(a)变体多肽，其包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与选自SEQ ID NO:3至SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:159中所示的GH8木聚糖酶的组中的GH8木聚糖酶的成熟部分具有至少60%序列同一性；

(b)变体多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在至少中等-高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:2中所示的成熟多肽编码序列，或(ii)(i)的全长互补链；

(c)变体多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸包含核苷酸序列，所述核苷酸序列与SEQ ID NO:2中所示的成熟多肽编码序列具有至少60%序列同一性；和

(d)(a)、(b)或(c)的变体，其包含一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或插入。

12.权利要求10或11的变体，其中所述亲本GH8木聚糖酶多肽包含第二保守GH8木聚糖酶基序：[ND][AS]X[RLPQ]    (SEQ ID NO:155)。

13.权利要求10-12任一项的变体，其中所述成熟亲本GH8木聚糖酶多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:3中所示的GH8木聚糖酶的成熟部分至少60%相同。