[发明专利]一种检测食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）从食品中分离出腐败菌，经发酵取得菌株发酵液，将菌株发酵液按照1%接种量接种到含有氨基酸的液体培养基中，取得生物胺检测用腐败菌发酵液，再通过离心取得无菌体的上清，在上清和生物胺混合标准溶液中分别加入Na₂HPO₄、NaOH和丹磺酰氯溶液，然后在55℃水浴避光条件下分别取得腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品；

2）将G60硅胶板在105℃下活化；

3）将由氯仿、乙醚和三乙胺混合制成的展开剂预饱和；

4）使用自动点样台点样，腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品的上样量为2μL，间隔1.5cm，待样点干燥后，置入展开槽内，待展开剂扩展到距样点17cm处取出，通风厨内干燥，在366nm紫外灯下使用自动凝胶成像分析分别拍照，通过比对，根据Rf值确定样品中生物胺的种类，判断菌株的氨基酸脱羧酶活性。

2.根据权利要求1所述检测食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法，其特征在于所述含有氨基酸的液体培养基是将L-赖氨酸盐酸盐、L-酪氨酸二钠盐、L-苯丙氨酸、L-组氨酸盐、L-精氨酸、L-鸟氨酸盐酸盐和L-色氨酸加入选择性培养基中灭菌取得，其中每1000mL选择性培养基中加入的L-赖氨酸盐酸盐、L-酪氨酸二钠盐、L-苯丙氨酸、L-组氨酸盐、L-精氨酸、L-鸟氨酸盐酸盐和L-色氨酸分别为1g。

3.根据权利要求1所述食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法，其特征在于所述生物胺检测用腐败菌发酵液的取得方法是：将筛选好的菌株的在培养基中划线培养，等单菌落长出后挑选单菌落到不含氨基酸前体的液体培养基中，培养12h后，再按照1%接种量转接到含有氨基酸的液体培养基中培养4~6天后获得。

4.根据权利要求1所述检测食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法，其特征在于将生物胺检测用腐败菌发酵液在低温条件下10000rpm离心5min，取无菌体的上清，并将该上清500μL和生物胺混合标准溶液分别与500μL 0.25mol/L的Na₂HPO₄，50μL 4mol/L的NaOH，1mL 2.5mg/L的丹磺酰氯溶液加入离心管，然后在离心管外边包上锡箔纸避光，放入到55℃水浴锅中避光衍生1h，分别取得腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品，并将分别取得腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品置于4℃保存。

5.根据权利要求1所述检测食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法，其特征在于所述氯仿、乙醚和三乙胺的混合投料体积比为8︰1︰2。