[发明专利]一种检测食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的方法

说明书

技术领域

本发明属于农产品技术研究领域，具体涉及食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的检测方法。

背景技术

生物胺是由于微生物的活动使得某些氨基酸发生脱羧化而产生的一类低分子有机碱。适量的生物胺有助于人类及动物的正常生理功能，然而人体器官内生物胺含量过度增加则会干扰神经、胃肠道系统以及血压的正常功能。某些生物胺还是亚硝胺的前体，后者具有致癌效应，因此消费者摄入较多的生物胺会对健康带来不良影响。肉制品中的某些腐败微生物会在氨基酸脱羧酶的作用下使得游离氨基酸发生脱羧反应形成生物胺，从而给产品的安全性带来隐患。只有弄清产生生物胺的主要微生物组成，才能有针对性地采取保鲜措施，控制生物胺的累积。

发明内容

本发明的目的是提供一种食品中腐败菌氨基酸脱羧酶活性的快速检测方法。

本发明包括以下步骤：

1）从食品中分离出腐败菌，经发酵取得菌株发酵液，将菌株发酵液按照1%接种量接种到含有氨基酸的液体培养基中，取得生物胺检测用腐败菌发酵液，再通过离心取得无菌体的上清，在上清和生物胺混合标准溶液中分别加入Na₂HPO₄、NaOH和丹磺酰氯溶液，然后在55℃水浴避光条件下分别取得腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品；

2）将G60硅胶板在105℃下活化；

3）将由氯仿、乙醚和三乙胺混合制成的展开剂预饱和；

4）使用自动点样台点样，腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品的上样量为2μL，间隔1.5cm，待样点干燥后，置入展开槽内，待展开剂扩展到距样点17cm处取出，通风厨内干燥，在366nm紫外灯下使用自动凝胶成像分析分别拍照，通过比对，根据Rf值确定样品中生物胺的种类，判断菌株的氨基酸脱羧酶活性。

本发明提供了一种食品中腐败菌菌株氨基酸脱羧酶活性的快速检测方法，该方法具有以下的优点：

（1）方便快捷，成本较低，需要的配套设备较低，普通实验室以及食品企业的品控部门都可以进行该试验。

（2）各种生物胺的分离效果较好，并且对生物胺的检测限同高效液相色谱的检测限可媲美，可以准确实现对生物胺的定性检测。

本发明所述含有氨基酸的液体培养基是将L-赖氨酸盐酸盐、L-酪氨酸二钠盐、L-苯丙氨酸、L-组氨酸盐、L-精氨酸、L-鸟氨酸盐酸盐和L-色氨酸加入选择性培养基中灭菌取得，其中每1000mL选择性培养基中加入的L-赖氨酸盐酸盐、L-酪氨酸二钠盐、L-苯丙氨酸、L-组氨酸盐、L-精氨酸、L-鸟氨酸盐酸盐和L-色氨酸分别为1g。

本发明所述生物胺检测用腐败菌发酵液的取得方法是：将筛选好的菌株的在其适宜的培养基中划线培养，等单菌落长出后挑选单菌落到不含氨基酸前体的液体培养基中，适温下培养12h后，再按照1%接种量转接到含有氨基酸的液体培养基中，适温下培养4~6天后获得。

本发明中，将生物胺检测用腐败菌发酵液在低温条件下10000rpm离心5min，取无菌体的上清，并将该上清500μL和生物胺混合标准溶液分别与500μL 0.25mol/L的Na₂HPO₄，50μL 4mol/L的NaOH，1mL 2.5mg/L的丹磺酰氯溶液加入离心管，然后在离心管外边包上锡箔纸避光，放入到55℃水浴锅中避光衍生1h，分别取得腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品，并将分别取得腐败菌生物胺的衍生样品和标准生物胺的衍生样品置于4℃保存。

本发明所述氯仿、乙醚和三乙胺的混合投料体积比为8︰1︰2。

附图说明

图1为不同浓度的混合生物胺标准品的衍生样品的薄层层析检测后的紫外成像图。

图2为部分单一生物胺标准品的衍生样品的薄层层析检测后的紫外成像图。

图3为腐败菌发酵液中生物胺衍生样品的薄层层析检测后的紫外成像图。

图4为盐水鸭样品中某些腐败菌发酵液中生物胺检测的高效液相色谱图。

图5为盐水鸭样品中某些腐败菌发酵液中生物胺检测的高效液相色谱图。

图6为本发明的操作步骤图。

具体实施方式

下边结合图6对本发明提出的一种食品中腐败菌菌株氨基酸脱羧酶活性的快速检测方法进行详细的说明。

一、普通需氧菌的检测：