[发明专利]一种齐考诺肽的固相合成方法

权利要求书

1.一种齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)以Fmoc-氨基树脂为固相载体，从C端到N端依次缩合反应连接25个侧链保护的氨基酸，得到25个氨基酸的线性全保护肽树脂，其中，形成二硫键的三组Cys分别连接Trt、Acm或tBu保护基，同组的Cys连接相同保护基，不同组的Cys连接不同的保护基；

(2)将步骤(1)得到的线性全保护肽树脂中的树脂进行切割，切割的同时脱去除Cys(Acm)和Cys(tBu)的其它所有氨基酸的侧链保护基，得到含Cys(Acm)和Cys(tBu)的线性肽；

(3)氧化步骤(2)得到的线性肽形成第一对二硫键，同时脱除Cys(Acm)中的Acm保护基并形成第二对二硫键，得到二环肽；

(4)脱除步骤(3)得到的二环肽中的Cys(tBu)的tBu保护基，同时环化形成第三对二硫键，得到含三对二硫键的齐考诺肽。

2.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的氨基树脂为Rink-Amide-MBHA树脂、Rink-Amide树脂、Rink-Amide-BHA树脂、Rink-Amide-AM树脂或Sieber树脂。

3.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)中，25个氨基酸的线性全保护肽树脂为：

H-Cys(tBu)-Lys(Boc)-Gly-Lys(Boc)-Gly-Ala-Lys(Boc)-Cys(Acm)-Ser(tBu)-Arg(pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(tBu)-Thr-Gly-Ser(tBu)-Cys(Acm)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Cys(Trt)-氨基树脂

4.根据权利要求1或2或3所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)中，按1∶(1～5)∶(1～5)∶(1～5)∶(2～10)的摩尔比分别称取溶胀后的氨基树脂、Fmoc保护氨基酸、HoBt、HBTU和DIPEA，将Fmoc保护氨基酸、HoBt、HBTU和DIPEA溶于二甲基甲酰胺，预活化，然后加入溶胀后的氨基树脂，室温震荡反应0.5～3小时连接Fmoc保护氨基酸，连接下一个氨基酸之前Fmoc的脱除用哌啶的N，N二甲基甲酰胺溶液脱Fmoc保护基2次，时间分别为3-5分钟和15-25分钟，每次连接上一个氨基酸和脱除Fmoc保护基后用二氯甲烷和二甲基甲酰胺交替洗涤3-10次。

5.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(2)中，将三氟乙酸、苯甲硫醚、二巯基乙烷和苯甲醚按90∶5∶2.5∶2.5的体积比混合，或者，将三氟乙酸、甲醇、水和三异丙基硅烷按体积比88∶5∶5∶2混合，将步骤(1)得到线性全保护肽树脂加入上述两种混合液中的任意一种中，震荡反应0.5～3小时后，将反应液注入冷乙醚中，沉淀，离心后收集沉淀，得到含Cys(Acm)和Cys(tBu)的线性肽。

6.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(3)中，将步骤(2)得到的线性肽溶于乙酸，加入10倍摩尔量的I₂，室温搅拌反应1小时，然后加入水，反应完全后，加入抗坏血酸直到溶液变为无色，反应混合液冻干，得到二环肽。

7.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(4)中，将二甲基亚砜和苯甲醚溶于三氟乙酸配制成氧化溶液，将步骤(3)得到的二环肽加入上述氧化溶液中，室温震荡反应3-7小时，加水稀释后冻干，纯化后得到齐考诺肽。