[发明专利]人鼠嵌合型CD4质粒及其多抗在抑制HIV感染中的应用

权利要求书

1.一种人鼠嵌合型CD4质粒，其特征在于，所述质粒的序列如SEQ ID No.8所示。

2.权利要求1所述质粒在制备介导HIV病毒感染药物中的应用。

3.权利要求1所述的人鼠嵌合型CD4质粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)分别从Ghost细胞和小鼠脾细胞提取总RNA；

(2)利用P1、P2扩增人总RNA得到人CD4，P3、P4扩增鼠总RNA得到鼠CD4；

(3P3、P10扩增鼠CD4得到鼠CD4信号肽；P11、P7扩增人CD4得到人CD4 V1V2区序列；利用P3、P7扩增鼠CD4信号肽及人CD4 V1V2区获得鼠CD4信号肽与人CD4 V1V2区嵌合产物；

(4)将步骤(3)获得的产物经三轮PCR扩增最终得到人鼠嵌合型CD4质粒；第一轮PCR扩增引物为P3、P8，第二轮PCR扩增引物为P9、P4，第三轮PCR扩增引物为P3、P4；

所述引物P1序列如SEQ ID No.9所示，引物P2序列如SEQ ID No.10所示，引物P3序列如SEQ ID No.11所示，引物P4序列如SEQ ID No.12所示，引物P7序列如SEQ ID No.13所示，引物P8序列如SEQ ID No.14所示，引物P9序列如SEQ ID No.15所示，引物P10序列如SEQ ID No.16所示，引物P11序列如SEQ ID No.17所示。

4.权利要求3所述的人鼠嵌合型CD4质粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR条件为：94℃5分钟；94℃30s、55℃退火40s，72℃延伸1分钟，20个循环；72℃延伸8分钟。

5.权利要求3所述的人鼠嵌合型CD4质粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中PCR条件为：94℃5分钟；94℃40s、55℃退火50s，72℃延伸90s，25个循环；72℃延伸8分钟。

6.一种人鼠嵌合型CD4多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：使用权利要求1所述的人鼠嵌合型CD4质粒DNA免疫4周龄BALB/C小鼠，分别在第1、21、35、49天小鼠双后肢肌肉注射100μL 1mg/mL权利要求1所述的质粒DNA，5mm宽双电极针60V电刺激注射部位，每次电刺激持续50-ms，共6次，免疫后10天收小鼠血清。

7.权利要求6所述的方法制备得到的人鼠嵌合型CD4多克隆抗体。

8.权利要求7所述的多克隆抗体在制备抑制HIV假病毒药物中的用途。

9.一种真核表达载体，其特征在于，其是利用权利要求1所述的质粒与载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO构建而成的。