[发明专利]一种筛选抗辐射的核苷酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种筛选核苷酸的方法，尤其是涉及一种筛选抗辐射的核苷酸的方法。

背景技术

随着核技术在军用核武器、贫铀弹和民用核电站、医用核素领域的应用，辐射相关方面的问题愈来愈受到人们的关注。辐射包括电磁辐射和粒子辐射。辐射是以一种高速运动穿入物质、可引起物质的原子发生电离或激发，造成细胞、组织的损伤。在有氧条件下，大剂量照射，除电离辐射的直接作用(电离激发与化学键断裂)外，由于机体内存在70％的水，电离辐射作用于机体内的水，产生的大量自由基(间接作用)，从而造成生物大分子和生物膜的损伤，细胞功能丧失，细胞周期紊乱和遗传的变异。随着现代军事及航天活动的发展，如宇宙空间的开发，航天员受辐射的威胁越来越大。核电站事故，使得陆地和海洋的所有生物暴露在天然水平的电离辐射环境的同时，也遭受着人造辐射，在这些放射性物质中，有此元素的半衰期长达数十年甚至数百年，这使得环境和人类的健康面临着长期的威胁。为了人类更好的生存与发展，有必要采取各种防护措施，提高机体自身对辐射的抵抗能力，特别是利用天然抗氧化剂对辐射的防护也不失为一条重要途径。目前国内有关新型抗辐射食品的研究报道不少，但对核苷酸类物质的辐射抗性的研究却很罕见。

核苷酸是生物体内重要的低分子化合物，具有许多生理功能，首先作为DNA、RNA的前体物质，是电离辐射损伤的主要靶分子。此外，也可作为生理、生化过程的调节物质参与体内物质代谢。动物机体能够由内源合成各种核苷酸，而缺乏时不表现典型的缺乏症。但近年来有研究表明，当机体迅速生长或受到免疫挑战时，一些器官、组织如肠、淋巴、骨髓细胞合成的核苷酸不能满足人与动物组织和细胞代谢的需要，需补充外源核苷酸以保证其组织生长和正常功能。因此，核苷酸的功能作用越来越引起关注。

发明内容

本发明主要是解决现有技术所存在的上述技术问题；提供了一种能对4种核苷酸的抗电离辐射作用进行初步筛选，选定抗电离辐射作用较好的5′-腺苷酸对辐射造成机体抗氧化指标的测定和评价进行分析的一种筛选抗辐射的核苷酸的方法。

本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的：

一种筛选抗辐射的核苷酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，用剪刀剔除结缔组织和脂肪并剪碎脾脏，将碎脾组织置于平皿内的不锈钢滤网上，所述不锈钢滤网大于等于200目，一手持网，另一手用注射器的针芯轻轻压挤脾组织，使单个核细胞经网入平皿内的PBS液中；吸取PBS液冲洗网；离心后低渗处理去除红细胞，再次离心洗涤，重悬细胞，制成1～5×10⁷个/ml单细胞悬液。以上操作过程中，细胞均置于0～4℃冰浴中，所述离心条件为：2000r/min×5min；

步骤2，将1～5×10⁷个/ml单细胞悬液分布于96孔板中，建立细胞X线辐照辐照损伤模型：在30KV、5mA的软X射线仪条件下照射100s～900s；

步骤3，根据步骤2，设计实验分为未辐照组、辐照组、辐照+样品处理组：1～5×10⁷个/ml单细胞悬液接于96孔板，样品组采用不同浓度的核苷酸(样品溶于培养液中)。样品加入后与细胞液在37℃5％CO2培养箱中共孵育2h后，进行辐照，照后24h，采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞致死情况，根据结果依次选择出细胞存活率较高的核苷酸。

核苷酸样品对细胞抗辐照致死作用按下列公式计算：

因此，本发明具有如下优点：能对4种核苷酸的抗电离辐射作用进行初步筛选，选定抗电离辐射作用较好的5′-腺苷酸对辐射造成机体抗氧化指标的测定和评价进行分析。

具体实施方式

下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。

实施例：

首先，筛选最佳辐照防护作用的5′-核苷酸：选取脾淋巴细胞作为辐照对象，采用四唑盐(MTT)比色法，通过检测辐照组、未辐照组以及加入核苷酸样品组的活细胞数，确定4种核苷酸中辐照能力较强的作为进一步的研究对象，包括以下步骤：

步骤1，用剪刀剔除结缔组织和脂肪并剪碎脾脏，将碎脾组织置于平皿内的不锈钢滤网上，所述不锈钢滤网大于等于200目，一手持网，另一手用注射器的针芯轻轻压挤脾组织，使单个核细胞经网入平皿内的PBS液中；吸取PBS液冲洗网；离心后低渗处理去除红细胞，再次离心洗涤，重悬细胞，制成1～5×10⁷个/ml单细胞悬液。以上操作过程中，细胞均置于0～4℃冰浴中，所述离心条件为：2000r/min×5min；