[发明专利]一种用CCl4诱导鲤鱼肝损伤模型筛选鱼类保肝药物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水产药物的筛选方法，具体涉及一种用四氯化碳(CCl₄)诱导鲤鱼 肝损伤模型筛选鱼类保肝药物的方法。

背景技术

近年来，由于环境污染，高蛋白、高脂肪或霉变饲料的使用、抗生素和杀虫剂的滥 用等因素所造成的鱼类肝胆综合症在全国许多地区频繁发生，造成了鲤、鲫、草鱼、团头鲂 和青鱼等多种鱼类的大面积死亡，死亡率高达60-90％，给水产养殖业造成极大的经济损失。

鱼类肝胆综合症的病因多样，但其共性都是造成鱼类肝组织损伤，进而引起代谢紊 乱并引发细菌和病毒感染而造成鱼类的死亡。各种抗生素、杀虫剂和抗病毒药物都不能有效 地控制鱼类肝胆综合症，该病目前还没有有效的治疗方法。

哺乳动物抗肝损伤药物的筛选通常选用小鼠(或大鼠)急性肝损伤模型，其中CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤模型是最经典的实验性肝损伤模型，被广泛应用于保肝药物的研究和 开发。鱼类是变温动物，药物在鱼体内与其在哺乳动物体内的代谢有所不同，因此用小鼠急 性肝损伤模筛选出的保肝药物对鱼类未必适用。

中国专利201010170675.2公开了一种用模式生物斑马鱼筛选抗肝损伤药物的方法， 该专利虽然用水产动物斑马鱼作为模型生物，但是筛选出的抗肝损伤药物对水产养殖中鱼类 肝病的预防并不适用。首先，该发明先用CCl₄浸泡斑马鱼诱导肝损伤，然后将受试药物加入 水中浸泡肝损伤的斑马鱼3天，因此该发明实际上是筛选肝损伤治疗药物而非预防药物，而 水产动物病害的防治是以预防为主；其次，该发明给药的方式是药物浸泡3天，在生产上如 果也通过浸泡的方式给药且全池使用，势必需要很大的药量，如果将池塘中的鱼集中用药浸 泡长达3天，虽然可以降低用药量，但操作难度极大，极易引起鱼类缺氧死亡，实用性不强； 另外，由于斑马鱼小，长度只有3-4厘米，体重不足1克，抽血难度极大，不能通过测量血 清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的变化来评价受试药物的抗肝损伤活性，只能检测 肝匀浆中的GPT和GOT，这样就必须将斑马鱼处死，取出其很小的肝脏，制成肝匀浆，操 作难度大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对水产养殖中日趋严重的以肝损伤为主要特征的 鱼类肝胆综合症，克服现有技术的不足，提供一种以肝胆综合症的主要危害对象鲤鱼为模型 生物筛选预防鱼类肝损伤药物的方法。

为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种用CCl₄诱导鲤鱼肝损伤模型筛选鱼类保肝药物的方法，具体包括以下步骤：

(1)取具有相同遗传背景的鲤鱼，随机分为正常对照组、CCl₄模型对照组、受试 药物组，每组鱼的数量相同，饲养在循环水养殖系统中，正常对照组和CCl₄模型对照组投喂 鲤鱼颗粒饲料，受试药物组投喂添加了受试药物的鲤鱼颗粒饲料，日投喂量为鱼体重的3％， 连续投喂1-2月。

(2)用药投喂1-2月后，按照每10g鱼体重注射0.05mL浓度为25-30％(v/v)的CCl₄植 物油溶液，对CCl₄模型对照组、受试药物组进行腹腔注射，正常对照组按照同样的剂量注射 植物油，48-72h后，将试验鱼麻醉，每条鱼尾静脉采血，离心分离血清，检测血清中的GPT、 GOT和LDH水平，根据GPT、GOT和LDH的变化评价受试药物的保肝功效，筛选鱼类保肝药 物。

作为优选方案，以上所述的用CCl₄诱导鲤鱼肝损伤模型筛选鱼类保肝药物的方法， 其中步骤(2)用CCl₄造模时，其浓度为25-30％的植物油溶液。因为CCl₄的浓度如果太高， 会对试验鱼造成严重的毒性，导致试验鱼的死亡，从而使造模失败；如果CCl₄的浓度如果太 低，不足以造成对试验鱼的肝损伤，也不能得到符合要求的肝损伤模型，本发明通过对不同 浓度的CCl₄浓度进行筛选，以试验鱼肝功能(血清中的GPT、GOT和LDH水平)为指标， 得出最佳造模所需的CCl₄浓度为30％的植物油溶液。