[发明专利]一种朊蛋白抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种朊蛋白抗体及其制备方法和应用。

背景技术

朊病毒相关疾病(又称Prion疾病)是一组表现为散发性、家族性及传播性的中枢神经系统的慢性退行性疾病，为人兽共患的新型传染病。该疾病的主要特点是中枢神经细胞大量死亡、大脑空泡化以及伴随的星型胶质细胞增生等，这些病变导致运动障碍、痴呆，最终导致患病动物死亡。

目前，动物的Prion疾病有多种，除羊痒病(Scrapie)外，还包括传染性水貂脑病(TME)，鹿慢性消耗性疾病(CWD)，牛海绵状脑病(BSE)及猫海绵状脑病(FSE)；人的Prion疾病有克雅氏病(CJD)，库鲁病(KURU)和格斯特曼综合征(GSS)和家族致死性失眠症(FFI)等。绵羊和山羊的痒病是Prion病的原型，疯牛病就是通过污染了痒病病原的反刍动物肉骨粉而传播的。近年来越来越多的证据支持疯牛病是人类新变异型克雅氏病(nvCJD)的病因，引起了全世界对疯牛病的恐慌，各国政府均对该病给予高度重视，我国也已将其列为法定报告动物疾病。朊病毒疾病等对人类社会的卫生、经济和食品安全都存在着严重的威胁。

异常折叠的PrP^Sc具有部分抵抗蛋白酶K消化的能力，经蛋白酶K消化后，N端被降解而C端保留，从而形成一个分子量大于为27-30kDa的片段，而正常折叠的朊蛋白经蛋白酶K消化后则被完全降解。经典的朊病毒检测方法正是基于朊蛋白以上的生物化学性质，将待测样品经蛋白酶K消化后进行western blot检测，如果有27-30kDa的条带则判断为阳性，否则为阴性。该方法已经成为确诊一个动物个体是否有朊病毒感染的金标准。

目前存在若干Prion疾病的防治手段，如敲除家畜的Prion基因，制备不产生朊蛋白的家畜，但是该方法费用昂贵，转基因克隆动物存活率低，不易推广。

就Prion疾病得诊断方法而言，国际上普遍采用特异性抗PrP抗体介导的免疫学检测方法。朊蛋白类疾病的检测市场异常巨大，种类繁多(各种动物肉制品、动物肉骨粉饲料、动物以及人血液制品、甚至包括有些化妆品等)，每年光涉及疯牛病牛群的检测、进出口牛肉的检测样品至少有几百万甚至几千万份，现有技术获得的朊蛋白抗体无法满足大量的检测市场的需要。因此，本领域迫切需要建立快速、准确的诊断方法，且批量生产各类抗朊蛋白抗体，为Prion疾病的诊断与防治、切断感染源，减少Prion疾病的传播提供保证。

发明内容

本发明的目的是提供一种朊蛋白抗体。

本发明的另一目的是提供一种制备所述抗体的方法。

本发明的另一目的是提供所述抗体方法的应用。

在本发明的第一方面，提供了一种分离的、特异性与朊蛋白结合的抗体，所述的抗体具有以下特征：

(a)由不表达朊蛋白的动物所产生的，并且特异性针对该种动物的朊蛋白；

(b)所述抗体与所述动物的朊蛋白的结合效价大于10000；

其中，所述动物为家畜。

在另一优选例中，所述的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、抗血清。

在另一优选例中，所述的抗体的类型为IgG。

在另一优选例中，所述抗体由不表达朊蛋白的羊产生且特异性针对羊的朊蛋白。

在另一优选例中，所述抗体的效价大于12000。

在另一优选例中，所述抗体的效价大于15000，较佳地，所述抗体的效价为16000-25000。

在另一优选例中，所述抗体是通过包括以下步骤的方法制备的：

(1)提供不表达朊蛋白的动物，所述动物为家畜；

(2)用朊蛋白作为抗原免疫步骤(1)所述的动物，使所述动物产生所述抗体；

(3)收集含有所述抗体的动物血清，获得本发明第一方面所述的抗体。

在本发明的第二方面，提供了本发明第一方面所述抗体的用途，所述抗体用于：

(i)检测待测样本是否感染朊蛋白或朊病毒；

(ii)制备检测待测样本是否感染朊蛋白或朊病毒的试剂。

在本发明的第三方面，提供了一种制备本发明第一方面所述抗体的方法，包括步骤：

(1)提供不表达朊蛋白的动物，所述动物为家畜；

(2)用朊蛋白作为抗原免疫步骤(1)所述的动物，使所述动物产生所述抗体；

(3)收集含有所述抗体的动物血清，获得本发明第一方面所述的抗体。