[发明专利]一种siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子遗传和基因治疗学领域，具体地说，本发明是关于一种能抑制胰腺癌细胞panc-1生长的siRNA及其应用。

背景技术

胰腺癌恶性程度极高，早期缺乏特异症状，手术切除率低，生存时间短，预后极差，5年生存率低于5％(Maitra A，Hruban RH.Annu Rev Pathol，2008，3：157-188)。截至目前，手术治疗是有希望获得治愈性治疗的唯一手段(LoosM，Kleeff J，Friess H，et al.AnnN YA cad Sci，2008，1138：169-180)，但临床上发现时多数已处于中晚期。局部复发是胰腺癌术后治疗失败的主要原因，近80％的患者在肿瘤切除后出现局部复发，因此只有采取各种综合治疗手段包括手术、化疗等来延长患者的生存时间。胰腺癌发生与基因突变、缺失、基因扩增、DNA错配修复基因失活、表观遗传学静止、蛋白表达异常等有关。比如，约30％的人类肿瘤出现ras基因的点突变，其次是N-ras(15％)，再次是H-ras(小于1％)。ras基因激活突变作为一个早期的基因突变事件，与胰腺导管上皮细胞恶性转变及胰腺癌的发展息息相关，在胰腺癌中K-ras的突变率几乎达到100％(Klimstra DS，Longnecker DS.Am J Pathol，1994，145：1547-1550)。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)现象最早是由Jorgensen等在研究矮牵牛花的颜色时发现的。它是指通过内源性或外源性双链RNA(double strand RNA，dsRNA)的介导，特异性降解相应序列的mRNA，导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能型缺失的现象，属于转录后水平的基因沉默(post-transcript gene silencing，PTGS)(Hamm and SM，Bernstein E，BeachD，et al.Nature，2000，404：293-296)。RNAi是一种高效的特异性强的基因阻断技术，近年来发展迅速，很快就成为功能基因组研究的有力工具，它具有特异性、选择性、高效性、作用迅速等特点。RNAi技术可以高效、特异的抑制原癌基因的表达，从而降低处于异常活跃状态的信号通路，逆转癌细胞的恶性表型，达到治愈肿瘤的目的。因此，RNAi技术在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。

核糖体蛋白是组成核糖体的主要成分，近来研究发现，核糖体具有参与DNA修复、细胞发育调控和细胞分化等核糖体外功能。它通过促进核糖体RNA折叠而使之处于最利于其执行翻译功能的构象状态，而提高蛋白质生物合成的效率和准确度，参与细胞增殖、分化和凋亡，在生物体的生长、发育中起着关键性的作用(Hide K，Daita N，Eiko H，et al.J Histochem Cytochem，2003，51：567-573)。在胃癌、结直肠癌、食管癌和肝癌等肿瘤组织中一些核糖体蛋白基因高表达，核糖体蛋白基因过表达可能具有调控翻译、抗凋亡等作用(Reggen D，Fandolf P.J Cancer，2003，3：179-190)。核糖体蛋白基因过表达在肿瘤诊断和治疗上的作用已引起国际上的关注。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于RNA干扰(RNAi)技术的针对胰腺癌细胞的核糖体基因mRNA的RNA干扰片段。

以RNA干扰技术为基础，从GenBank获得人的核糖体蛋白L21(RPL21)的cDNA序列，根据siRNA靶序列的基本原则，针对RPL21基因设计了一条21个核苷酸的siRNA：siRNA21-1，对应RPL21基因mRNA中332-352核苷酸位点，序列如下：

反义链5’-AUCUCGGCUCUUAGAGUGCdTdT-3’；

正义链5’-GCACUCUAAGAGCCGAGAUdTdT-3’。

根据本发明的优选实施例，所述干扰片段的3’端还添加了两个脱氧核糖核苷酸。

优选的，所述脱氧核糖核苷酸呈单链悬挂结构，以增强siRNA在体内和体外的稳定性，防止降解。

本发明的所述RNA干扰片段可用于制备治疗胰腺癌的药物。

根据本发明，所述药物抑制胰腺癌细胞的生长。

根据本发明，所述抑制胰腺癌细胞的生长是通过抑制核糖体蛋白基因RPL21的表达来实现。

本发明的siRNA21-1能高效特异性地抑制相应核糖体蛋白基因RPL21的mRNA水平表达，进而能抑制胰腺癌细胞panc-1的生长，因而可以用于制备治疗胰腺癌的药物。

附图说明