[发明专利]一种共表达An Man5A和XynⅡ的毕赤酵母系统无效
| 申请号： | 201110410598.8 | 申请日： | 2011-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN102559526A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 李剑芳;魏喜换;赵顺阁;邬敏辰;殷欣 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N9/42;C12R1/84 |
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| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 an man5a xyn 酵母 系统 | ||
1.一种共表达源自黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1的β-甘露聚糖酶基因(An man5A)和源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-1，4-木聚糖酶基因(xyn II)的毕赤酵母新表达系统。
2.共表达An man5A和xyn II的毕赤酵母系统的构建和表达方法：
(1)GS115/man5A的构建、表达及活性测定：用Sac I对pPICZαA-man5A进行线性化，按照毕赤酵母表达手册进行电转化GS115感受态细胞，用Zeocin筛选得到高拷贝的毕赤酵母重组子GS115/man5A；按照手册上的标准流程进行诱导表达，该工程菌用1.0％甲醇诱导96h，DNS法测得发酵液中重组甘露聚糖酶活性达29.05IU/mL；
(2)工程菌GS115/man5A-xyn II的构建：用Sal I对pPIC9K-xyn II进行线性化，按照毕赤酵母表达手册进行电转化GS115/man5A感受态细胞，用G418筛选得到高拷贝的毕赤酵母重组子GS115/man5A-xyn II；按照手册上的标准流程进行诱导表达，该工程菌用1.0％甲醇诱导96h，DNS法测得发酵液中重组木聚糖酶活性达112.10IU/mL，重组甘露聚糖酶活性仍为29.05IU/mL；SDS-PAGE电泳显示重组木聚糖酶和甘露聚糖酶分子量分别为24.1kDa和52.0kDa。
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