[发明专利]一种检测埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒和裂谷热病毒的多重PCR试剂盒及其引物

说明书

技术领域

本发明涉及病原分子生物学检测技术领域，具体涉及一种同时检测四种烈性传染病病毒，包括埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒和裂谷热病毒的多重荧光PCR检测试剂盒及其引物。 

背景技术

埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever，EHF)是由埃博拉病毒(Ebola virus，EBV)引起的一种急性出血性传染病。主要通过接触病人或感染动物的体液、排泄物、分泌物等感染，临床表现主要为发热、出血和多脏器损害。埃博拉出血热的病死率高，可达50％-90％。埃博拉病毒源于非洲的刚果，在生物安全等级上和天花病毒同为最危险的第四级，1976年首度在非洲扎伊尔北部和苏丹南部出现。世界卫生组织已将埃博拉病毒列为对人类危害最严重的病毒之一。埃博拉病毒属丝状病毒科丝状病毒属，可分为四种不同亚型：扎伊尔埃博拉(EBO-Z)，苏丹埃博拉(EBO-S)，科特迪瓦埃博拉(EBO-C)和莱斯顿埃博拉(EBO-R)。前3种亚型可使人和灵长类动物发病，其中扎伊尔埃博拉的致死率为88.8％；苏丹埃博拉则为53.2％。而瑞斯顿埃博拉只会使灵长类动物发病，但人类也可能感染这种病毒亚型从而成为无症状的病毒携带者，在西太平洋就有这种病例出现。埃博拉出血热有4个传播途径：直接接触病人的血液、分泌物等体液传播；通过直接接触病人尸体传播；处理发病或病死的猩猩、猕猴等动物引起传播；医务人员在护理病人时不采取有效的个人防护也会引起传播。此病目前没有有效药物可以治疗。 

马尔堡出血热(Marburg hemorrhagic fever，MHF)是由马尔堡病毒(Marburg Virus)引起的以急性发热伴有严重出血为主要临床表现的传染性疾病，经密切接触传播，传染性强，病死率高。由于马尔堡病毒来自于非洲绿猴并主要在非洲流行，因此马尔堡出血热又被称为青猴病和非洲出血热。历史上最大的马尔堡出血热暴发是于2004年10月始于安哥拉国威热省。截止2005年7月最后一例实验室确诊病例，安哥拉卫生部报告全国累计病例总数为374例，其中有329例死亡(病死率为88％)。 

拉沙热是一种名为拉沙病毒所引致的急性病毒感染，流行于西非洲的国家：几内亚、利比里亚、塞拉利昂和尼日利亚。病毒的宿主是西非洲的野鼠。拉沙热是经由气雾或直接接触染病的啮齿类动物排泄物而受感染，也可以直接经由病人在发热期传播。人类感染病毒后可以没有病徵，但亦可能病况严重，导至死亡。 

裂谷热(Rift Valley fever，RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever Virus，RVFV)引起的、是一种病毒性人畜共患病，主要影响的是动物，但也能传染人。传染可导致人畜患染严重疾病，发病率和死亡率极高。该疾病因裂谷热感染的牲畜死亡和流产，也会造成重大经济损失。裂谷热病毒是一种属于布尼亚病毒科白蛉病毒属、基因组为单股负链RNA的病毒，有包膜，直径约为90～100nm。绝大多数人感染裂谷热病毒是与受感染动物的血液或器官直接或间接接触所造成的，受感染蚊子叮咬也会导致人间感染，通常是伊蚊叮咬，嗜血(食血)苍蝇也有可能传播裂谷热病毒。境外一些来自疫区的感染者或媒介昆虫通过国境口岸的带入，均可引起裂谷热病毒在我国的扩散。 

随着与世界各国交通往来的日益频繁，境外一些来自疫区的人员可通过国境口岸进入我国，存在着将上述四种疾病输入我国的危险。现有技术或行业标准没有涉及到对上述四种病毒进行分子生物学快速检测鉴定。因此，有必要在国境口岸建立一套上述四种病毒的分子生物学快速检验鉴定方法。 

发明内容

为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种同时检测四种国外烈性传染病埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒和裂谷热病毒的多重荧光PCR检测试剂盒及其引物。 

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 

本发明提供的埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒和裂谷热病毒的多重荧光PCR检测试剂盒，包括 主反应液(QuantiFast Multiplex Master Mix)、RT反应液(QuantiFast RT Mix)等试剂外，还包括四种病毒的引物和探针，如SEQ ID NO：1-13所示的引物，以及序列如SEQID NO：14-18所示的探针。 

引物的具体序列如下： 

Ef：CGGACACACAAAAAGAAAGAA 

Er1：ATCAGTGTCAATGAGAGGAAAAT 

Er2：ATTAGTTTGAGTTTGAGGAAAATG 

Mf：CATCTGATGGGATTCACACTGAG