[发明专利]包含通过疏水部分修饰的肽的基于脂质体的构建体

权利要求书

1.制备基于脂质体的构建体的方法，所述方法包括以下步骤

i在溶液中制备脂质体；

ii通过将至少一个疏水性部分添加至肽的N及/或C端来制备经修饰的肽；

iii在表面活性剂存在下溶解经修饰的肽，以使得经修饰的肽是微团形式；

iv通过将溶解的修饰的肽添加到制备的脂质体中并且将溶解的修饰的肽稀释至表面活性剂的临界微团浓度以下，从而修饰的肽的微团形式被破坏因而驱动修饰的肽的疏水部分整合至预形成的脂质体的外层中，来装载步骤(i)的制备的脂质体；

从而至少72％的经重构的肽存在于脂质体的外表面上。

2.权利要求1的方法，其中所述修饰的肽是淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白，所述淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白选自阮病毒蛋白、τ蛋白质、α-突触核蛋白、亨庭顿蛋白、糊精和淀粉样蛋白-β或者一种或多种上述肽的组合。

3.权利要求1的方法，还包括用佐剂装载预形成的脂质体，其中(a)在用经稀释的溶解的修饰的肽装载脂质体之前；(b)与其一起；或(c)在其之后进行佐剂装载。

4.权利要求3中的方法，其中佐剂是脂A。

5.权利要求3中的方法，其中所述佐剂是去毒脂A。

6.权利要求3的方法，其中所述佐剂是单磷酰或二磷酰脂A、明矾、Pam 2CSK4、Pam3CSK4、Pam3CAG、皂苷、CpG、脂化CpG、阳离子型脂类、硫代磷酸化的PS-CpG-ODN，或CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)。

7.权利要求6的方法，其中所述佐剂是CpG-A、CpG-B或CpG-C。

8.权利要求1至3中任一项的方法，其中至少80％的经重构的抗原性肽存在于脂质体的外表面上。

9.权利要求1至3中任一项的方法，其中至少90％的经重构的抗原性 肽存在于脂质体的外表面上。

10.权利要求1至3中任一项的方法，其中100％的经重构的抗原性肽存在于脂质体的外表面上。

11.权利要求1至3中任一项的方法，其中肽是通过添加脂肪酸、甘油三酯、甘油二酯、类固醇、鞘脂、糖脂或磷脂来修饰的。

12.权利要求11的方法，其中脂肪酸是棕榈酸。

13.权利要求1至3中任一项的方法，其中肽是通过共价附着的棕榈酰基化的氨基酸残基来修饰的。

14.权利要求13的方法，其中介于2个与4个之间的残基分别共价附着于肽的N及C端。

15.权利要求14的方法，其中肽是通过4个棕榈酰基化的氨基酸残基来修饰的，其中两个残基分别共价附着于肽的N及C端。

16.根据权利要求1-15的任一项的方法产生的基于脂质体的构建体，所述构建体包含在脂质体中重构的通过疏水性部分修饰的抗原性肽和佐剂，其中至少72％的经重构的肽存在于脂质体的外表面上，并且其中所述肽通过其疏水性部分插入脂双层中而不借助任何化学反应或额外的分子修饰，并且其中所述抗原性肽能够在施用给哺乳动物时，在所述动物中产生免疫应答。

17.权利要求16的构建体，其中所述抗原性肽来自淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白，所述淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白选自阮病毒蛋白、τ蛋白质、α-突触核蛋白、亨庭顿蛋白、糊精和淀粉样蛋白-β或者一种或多种上述肽的组合。

18.权利要求16或权利要求17的构建体，其中肽不通过共价缀合与脂质体膜结合。

19.权利要求16至17中任一项的构建体，其中至少80％的经重构的抗原性肽存在于脂质体的外表面上。

20.权利要求16至17中任一项的构建体，其中至少90％的经重构的抗原性肽存在于脂质体的外表面上。

21.权利要求16至17中任一项的构建体，其中100％的经重构的抗原性肽存在于脂质体的外表面上。

22.权利要求16至17中任一项的构建体，其中佐剂是脂A。

23.权利要求16至17中任一项的构建体，其中佐剂是去毒脂A。