[发明专利]一种草鱼水霉病疾病模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及试验动物疾病模型的建立方法，具体地说，是一种草鱼水霉病疾病模型的建立方法。

背景技术

水霉病（Saprolegniasis）又叫肤霉病（Dermatomyucosis），是由丝状真菌引起的一种水产养殖常见病害，其中最主要的病原是水霉（Saprolegnia）和绵霉（Achlya）两个属的种类，二者均属于水霉科（Saproleniaceae）。水霉对寄主无严格选择性，各种水产动物从卵到各龄成体都可感染。一般认为水霉是腐生性的，对水产动物是一种继发感染。养殖动物受伤或因组织的营养而迅速生长，致命组织发炎、坏死，鱼体负担过重，游动失常，食欲减退，很快瘦弱死亡。长期以来，水霉病的防治是鱼类病害防治中最棘手的一个难题之一。为了更有效的防治水霉病，现在许多国家的研究者致力于这方面的研究工作，而水霉病疾病模型的建立则是水霉病防治研究中的重要一环。

鱼类试验动物疾病模型在新渔药研发过程中起着举足轻重的作用，新渔药研发流程有以下四个阶段：第一个阶段是发明（发现）阶段，第二个阶段是非临床（临床前）研究阶段，第三个阶段是临床研究阶段，第四个阶段是上市后阶段。鱼类试验动物疾病模型一般在第三阶段发挥作用，此阶段主要确定新渔药产品是否有进一步研发的意义。该试验包括试验动物疾病模型耐受性试验，寻找有效剂量和中毒剂量范围，确定试验动物的有效性和安全性；开展试验动物疾病模型的药代动力学及生物利用度试验，为下步推荐临床使用剂量提供依据，即用健康靶动物在可控条件下进行药效对照试验，并进行鱼类试验动物疾病模型药代动力学试验，确定初步的有效剂量，因此也有人称为剂量确定实验。

试验动物疾病模型对于学科和技术的发展极为重要，医学和陆生动植物已建立了包括动物试验、组织培养和病原保藏中心等在内的数百种标准试验模型，有力地促进了医学和陆生动植物病害研究的发展，而水生生物标准的试验模型（包括组织培养模型、鱼类试验动物疾病模型和病原库）相对来说数量极少。而目前关于草鱼（Ctenopharyngodon idellus，属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属）水霉病疾病模型及其建立方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种草鱼水霉病疾病模型的建立方法。 

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种草鱼（Ctenopharyngodon idellus）水霉病疾病模型的建立方法，所述的方法选自下列方法中的一种：

1）将草鱼刮伤后置于含水霉孢子1×10³～1×10⁵个/mL的水体中，25℃下恒温养殖；

2）将草鱼刮伤后置于含水霉孢子1×10³～1×10⁵个/mL的水体中，使水温在1h内降低8～12℃或者使水温在1h内升高8～12℃，养殖。

所述的水霉是多子水霉（Saprolegnia ferax）。

所述的水体是经曝气、消毒和去氯处理后的自来水。

所述的水体pH值是6.5～6.8。

所述的水体是经下述方法处理的：接种水霉至水中，在水温20～30℃条件下培养霉菌至其浓度为1×10³～1×10⁵个/mL。

所述的草鱼体重40～55g、体长15～17cm。

所述的草鱼是经下述方法刮伤的：将背鳍下方两侧鳞片去掉，擦拭去掉鳞片部位的皮肤2～4cm²，并擦拭掉伤口表面的粘液。

所述的方法优选将25℃下养殖的草鱼刮伤后置于含水霉孢子1×10³～1×10⁵个/mL的水体中，使水温在1h内由25℃降低至15℃，养殖48h以上。

本发明优点在于：

1、本发明的方法——将草鱼刮伤后置于含水霉孢子1×10³～1×10⁵个/mL的水体中，25℃下恒温养殖，该方法平均可获得13.3%的草鱼水霉病模型，克服了水霉病发病不确定、难以收集水霉病鱼体的缺陷，令研究者可随时采用实验性诱发的方法在鱼体身上复制出来，取得条件一致的模型材料，为水霉病的研究和防治提供了重要的手段和工具。