[发明专利]一种萃取红豆杉加工剩余物中多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种萃取方法，具体涉及一种萃取红豆杉加工剩余物中多糖的方法。

背景技术

红豆杉植物中含有的紫杉醇具有独特的抗肿瘤机制和显著的抑制肿瘤作用，被认为当今最有开发前途的抗癌药物。自从上个世纪70年代发现紫杉醇以来，在世界范围内对其研究主要包括紫杉醇的萃取分离纯化、紫杉醇的全合成、半合成、紫杉醇的结构修饰及衍生物的抗癌活性和红豆杉植物的细胞培养、生物转化等，相关的研究论文和专利也多不胜数。但是，这些研究都是针对红豆杉植物中的紫杉醇和相关的紫杉醇类似物。红豆杉中除了含有紫杉醇等二萜类化合物外，还含有三萜、甾类、黄酮和酚类化合物。最近研究发现，红豆杉枝叶中含有的多糖也具有显著的生物活性，例如，提高免疫、保护肝脏等功效，对肿瘤也有一定的辅助治疗作用。然而，目前关于红豆杉多糖的研究很少，尚处于研究的初级阶段。

我国的红豆杉资源占世界的50%以上，拥有巨大的资源优势。辽宁、云南、四川、浙江等地拥有大量的人工种植红豆杉基地。这些红豆杉原料主要用于紫杉烷类物质的萃取。萃取紫杉烷类物质所用的溶剂为乙醇，将易溶于有机溶剂的物质溶解提出，而多糖类是水溶性物质，难溶于乙醇溶剂。因此，萃取完紫杉烷的原料废渣中主要是含有水溶性较大的多糖类物质。在传统的工艺中，原料残渣被当作废料丢弃，对活性资源物质造成了严重的浪费。

目前， 关于红豆杉多糖萃取的文献报道有：

《中医药临床杂志》(2010, 22(5): 465-466)介绍了一种采用低浓度乙醇为萃取溶剂萃取红豆杉多糖的方法。该方法以新鲜的红豆杉果实为原料，以5%乙醇为溶剂在15 ℃下浸泡、捣碎萃取7次，离心后将上层清液减压浓缩，加入乙醇至体积分数为80%沉淀, 离心得固体, 重溶, 过滤用无水乙醇洗沉淀物, 真空干燥, 得粗多糖。该方法所用的萃取原料为新鲜的红豆杉果实，不易获得、且生物量较小。

《中国现代中药》(2008, 10(6): 32-34)以朝鲜产东北红豆杉树皮萃取紫杉醇后的残渣为原料，对包括超声波、微波及传统水浴萃取在内的多糖萃取工艺进行比较研究。得出微波萃取最佳的结论，其微波萃取条件为：取红豆杉萃取完紫杉醇后的树皮残渣10 g，按液料比1:10加入蒸馏水，微波功率高火，微波辐射1 min，间隔l min后再辐射1 min，如此间隔辐射直至微波辐射总时间达到4 min，过滤。按同样条件重复萃取2次。滤液采用旋转蒸发减压浓缩至一定体积，浓缩液加入3倍体积的95%乙醇，至乙醇体积分数达到80%，静置24 h后，4000 r/min离心20 min，收集沉淀。沉淀加水复溶，滤过。滤液H₂O₂脱色，Sevage法除蛋白，滤过，透析，冻干得粗多糖。该方法利用微波萃取多糖对萃取设备要求较高，不利于放大生产。

《从红豆杉果实及花中萃取紫杉醇和多糖的方法》(中国专利CN1718575A)介绍了一种从红豆杉果实及花中萃取红豆杉多糖的方法，方法为：将萃取完紫杉醇后的红豆杉果实或花的滤渣放入多功能萃取罐，加8-10倍量水，煮沸，100 ℃下保温40-60 min，用板框过滤机（100目滤布）进行过滤，滤渣加6-8倍量水煮沸，100 ℃下保温2-3 h，过滤后，合并两次滤液，浓缩至原体积的1/8-1/10，加95%乙醇至乙醇浓度75-85%，精制60-80 min，经碟式分离剂分离，得红豆杉果实或花的多糖。该方法所用的萃取原料为新鲜的红豆杉果实，不易获得、且生物量较小。

《Food Chemistry》(2009, 113: 1020-024)介绍了一种利用沸水萃取南方红豆杉多糖的方法。将520 g脱脂后的南方红豆杉原料在10 L沸水中萃取3 h，收集萃取液，于减压条件下除去溶剂，在剧烈搅拌下加入3倍体积的90%乙醇。过滤得到的沉淀复溶于水中，离心，上清液浓缩后加入乙醇沉淀，该过程重复两次，得到的产物在去离子水中透析36 h，非渗透产物浓缩后，冻干得到粗多糖。该方法采用沸水浸提多糖效率低，所需时间较长。

《Carbohydrate Polymers》(2010, 82: 543-548)介绍了一种利用热水萃取云南红豆杉多糖的方法。将300 g干燥云南红豆杉枝粉碎后用丙酮和石油醚洗涤除去色素和油脂，剩余物用蒸馏水在90 ℃下萃取4 h。离心除去水不溶物，收集上清液，采用70%乙醇进行醇沉，于4 ℃下静置过夜。过滤后沉淀冻干后通过Sevag法除蛋白，然后在蒸馏水中透析24 h以除去低分子量的杂质，非透析产物冻干后得到棕色红豆杉多糖。该方法采用沸水浸提多糖效率低，所需时间较长。