[发明专利]西瓜花叶病毒的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种西瓜花叶病毒的单克隆抗体。

背景技术

西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)在分类上属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyvirus),此病毒被多种蚜虫以非持久方式传播。该病毒主要危害西瓜和甜瓜等葫芦科植物，引起花叶病，在国内西甜瓜产区广泛发生，造成的损失为30%～50%,甚至造成绝产，已经成为制约西瓜和甜瓜高产稳产最主要的因素之一。目前植物病毒的检测方法主要包括生物学、血清学和分子生物学方法，而单克隆抗体由于其是针对单一抗原决定簇产生的，所以具有特异性好的优势，为植物病毒免疫学方法的应用奠定了基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种西瓜花叶病毒的单克隆抗体及应用。

本发明提供了一种保藏号为CGMCC No.6100的西瓜花叶病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞株6C6。

本发明还提供了一种西瓜花叶病毒的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.6100的西瓜花叶病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞株6C6产生。

所述的单克隆抗体在检测西瓜花叶病毒抗原中的应用也是本发明保护的范围。

所述的单克隆抗体在制备西瓜花叶病毒检测试剂盒中的应用；或所述的单克隆抗体在制备检测西瓜花叶病毒的胶体金快速检测试纸条中的应用，上述应用均是本发明保护的范围。

含有所述的单克隆抗体的检测西瓜花叶病毒的试剂盒也是本发明保护的范围；或含有所述的单克隆抗体的检测西瓜花叶病毒的胶体金快速检测试纸条也是本发明保护的范围。

经筛选得到能稳定分泌的西瓜花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株6C6，该杂交瘤细胞株6C6的分类命名为分泌西瓜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已于2012年5月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏号为CGMCC No.6100。

本发明的实验证明，本发明研制的西瓜花叶病毒单克隆抗体的特异性好、效价高，与购自ATCC的3个西瓜花叶病毒分离物均起反应，具有较好的广谱性，应用于植物病毒血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所用的病毒和试剂如下：

南瓜，品种名：一味，购自北京世农种苗；

本生烟（Nicotiana benthamiana）：公众可以从中国检验检疫科学研究院获得；参考文献：黄峰，陈青，陈红运，白静，李桂芬等，黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制，植物检疫，2009年第4期，第23卷，24-26页。

昆诺藜(Chenopodium guinoa)：公众可以从中国检验检疫科学研究院获得；参考文献：李桂芬，朱水芳、周群等，侵染紫松果菊的黄瓜花叶病毒分离物的鉴定，植物保护，2007年第33卷，第1期，54-56页。

西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus，缩写：WMV），购自ATCC，编号：PV-27；西瓜花叶病毒，购自ATCC，编号PV-379；西瓜花叶病毒，购自ATCC，编号PV-511。接种在南瓜上。

马铃薯A病毒(Potato virus A，缩写：PVA)，购自DSMZ,DSMZ编号：PV-0320，接种在本生烟（Nicotiana benthamiana）上。

莴苣花叶病毒(Lettuce mosaic virus，缩写：LMV)，购自ATCC,编号：PV-63，接种在昆诺藜（Chenopodium quinoa）上。

李痘病毒（Plum pox virus，缩写：PPV），购自DSMZ，编号：PV-0213，接种在本生烟上。

碱性磷酸酯酶标记的马抗小鼠酶标抗体购自中杉金桥公司，货号:AP-2000。

样品抽提缓冲液为0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.5)，配方如下：

Na₂HPO₄·12H₂O      146.837g

KH₂PO₄              12.248g