[发明专利]一种替考拉宁单组份的制备方法

权利要求书

1.一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于：该方法包括下述步骤，

步骤1）预处理：在常温条件下，在替考拉宁发酵液中加入碱溶液，调节pH至11.0~13.0；将发酵液固液分离，所得滤液用酸溶液调节pH至7.0~7.5，得到替考拉宁滤液；

步骤2）脱色：将替考拉宁滤液导入大孔脱色树脂进行脱色，得到替考拉宁脱色液；

步骤3）吸附：将替考拉宁脱色液导入大孔吸附树脂进行吸附，再用溶剂解吸，所得替考拉宁解吸液，经浓缩、结晶、干燥，得到替考拉宁的粗提物；

步骤4）层析：将替考拉宁粗提物用水溶解，注入聚合物微球层析柱进行层析，然后用不同浓度的洗脱溶剂梯度洗脱，分别收集各段洗脱液，得到含有TA_2-1、TA_2-2、TA_2-3、TA_2-4、TA_2-5和TA_3-1六种单组份的替考拉宁单组份洗脱液；

步骤5）将六种替考拉宁单组份洗脱液分别浓缩、结晶、干燥，得到替考拉宁的单组份精粉。

2.根据权利要求1所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中碱溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；酸溶液为盐酸、硫酸或有机酸溶液的其中一种。

3.根据权利要求1 所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于：所述步骤2）中大孔脱色树脂为LX-98、LSA-700B、DM130或D303树脂的其中一种。

4.根据权利要求1所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于：所述步骤3）中大孔吸附树脂为HZ816、HZ801、D101或D312树脂的其中一种；所述溶剂为甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一种，溶剂浓度为40%~50%。

5.根据权利要求1所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于：所述步骤4）中层析介质为聚合物微球PS25-300、PS30RPC-300或PSA30-300的其中一种；所述洗脱溶剂为甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一种，洗脱溶剂浓度为25%~60%。

6.根据权利要求1~5任一项所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于：所述步骤4）中包括如下步骤，

步骤A) 将替考拉宁粗提物用蒸馏水溶解，注入聚合物微球层析柱进行层析，然后依次使用从低浓度到高浓度的洗脱溶剂梯度洗脱；

步骤B）根据HPLC对替考拉宁中各单组份的检测结果，分别收集TA_3-1、TA_2-1和TA_2-2的洗脱液；得到TA_3-1、TA_2-1和TA_2-2三种替考拉宁单组份洗脱液；

步骤C）根据HPLC对替考拉宁中各单组份的检测结果，分别收集TA_2-2与TA_2-3的HPLC峰面积百分比为1：2的混合液，TA_2-4与TA_2-5峰面积百分比为1：1的混合液；

步骤D）将步骤C）中得到的两种混合液浓缩至混合液浓度为100g/L，再次注入聚合物微球层析柱进行层析分离，然后依次使用从低浓度到高浓度的洗脱溶剂梯度洗脱，根据HPLC检测结果，分别收集TA_2-3 、TA_2-4和TA_2-5的洗脱液，得到TA_2-3 、TA_2-4和TA_2-5三种替考拉宁单组份洗脱液。