[发明专利]一种替考拉宁单组份的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种工业微生物技术领域中药品原料的制备方法，尤其是一种从发酵培养物中分离纯化替考拉宁单组份的制备方法。

背景技术

替考拉宁（Teicoplanin），为游动放线菌属(Actinoplanes teichomyceticus)发酵产生的一种糖肽类抗生素。它是由Teicoplanin A₂(TA₂)五种结构相似的糖肽类化合物(TA_2-1~TA_2-5)和去酰基葡糖胺Teicoplanin A₃(TA₃)组成的混合物。替考拉宁是继万古霉素后开发的另一种抗耐药菌糖肽类抗生素，它主要对革兰氏阳性需氧菌和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别对MRSA引起的感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的仍具有对多重耐药性金黄色葡萄球菌和肠球菌有活性的药物之一。与当前国际上公认的抗耐药菌抗生素万古霉素相比，替考拉宁具有与之相似的抗菌活性，相同的作用机理，相近或更优的临床疗效，但毒性更低，特别是更低的肾毒性，不会发生使用万古霉素后引发的“红人综合症”。替考拉宁具有比万古霉素更方便、快捷的给药途径，可以通过静注或肌注给药，应用更方便。此外，它与β-内酰胺类、氨基糖苷类和碳青霉烯类抗生素联用对绝大多数革兰氏阳性菌有协同杀菌作用。因此，对替考拉宁的研究与开发具有重要的经济价值和应用前景。

由于替考拉宁是两性化合物且结构中含有多个羟基，故易溶于水。另外，它易溶于二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙二醇，可溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，不溶于无机酸和非极性溶剂。国内外对其分离纯化方法进行了大量的研究，归纳起来主要有溶媒萃取法、吸附法、离子交换法和色谱法。

替考拉宁单组份的结构式为：

欧洲专利EP0137506公开了一种用溶剂萃取技术从发酵液中提取替考拉宁的方法，该方法将水溶性有机溶剂如丙酮、乙腈、正丙醇等直接加入到酸化的发酵液中聚集TA₂,再经离心或过滤除去菌丝体，其溶液部分经浓缩、冷却，沉淀出TA₂粗品，整个过程步骤繁琐，溶剂量消耗量大，产品纯度低。美国专利US2005245481A1公开了一种替考拉宁的生产工艺。该工艺通过对大孔树脂粗提液进行活性炭脱色，再次树脂分离、超滤、纳滤、结晶，可以得到纯度大于95%的替考拉宁精粉，但是对于TA₂各组分比例不能很好的控制。中国专利CN101302248A公开了一种高纯度替考拉宁的生产方法。该方法通过对替考拉宁粗品进行凝胶层析、大孔树脂分离、脱色、超滤、纳滤、结晶等过程，可以得到纯度大于93.1%的替考拉宁精粉，但步骤繁琐，而且只控制TA₂组比例，未提及到TA₂组各单组分的分离和比例控制情况。韩国专利Korean Pat. No.40453公开了一种从TA₂混合物中分离TA₂各个单组份的方法。该方法通过使用硅烷化硅胶柱和高效液相制备色谱，可以得到TA_2-1~TA_2-5五个单组份，但所使用的分离介质重复利用度低，且制备色谱对分离系统要求严格，导致该方法成本高、制备量小。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种工艺简单，收率稳定，成本低廉，可规模化生产替考拉宁单组份的制备工艺。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

一种替考拉宁单组份的制备方法，该方法包括下述步骤，

步骤1）预处理：在常温条件下，在替考拉宁发酵液中加入碱溶液，调节pH至11.0~13.0；将发酵液固液分离，所得滤液用酸溶液调节pH至7.0~7.5，得到替考拉宁滤液；

步骤2）脱色：将替考拉宁滤液导入大孔脱色树脂进行脱色，得到替考拉宁脱色液；

步骤3）吸附：将替考拉宁脱色液导入大孔吸附树脂进行吸附，吸附后先用低浓度的溶剂（浓度为15%~20%）进行冲洗，去除杂质，然后用高浓度的溶剂（浓度为40%~50%）解吸，所得替考拉宁解吸液，经浓缩、结晶、干燥，得到替考拉宁的粗提物；