[发明专利]一种二氧化氯对剑麻外植体材料消毒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物培养材料的消毒方法，具体说涉及一种利用二氧化氯对剑麻珠芽的外植体材料的消毒方法，属于植物组织培养技术的领域。

背景技术

近年来，植物种苗无菌培养快繁技术在农业生产上迅速发展，植物组织培养外植体材料的消毒灭菌多采用1000~2000mg/L的 HgCl₂(升汞)溶液，以及次氯酸钠、过氧化氢、酒精、抗生素等，这些杀菌剂处理后很难彻底去除或效果较差，使用操作也较繁琐，工作效率低。

剑麻外植体的传统消毒方法采用含有Hg²⁺的消毒剂，对环境和人体的毒性较大，使用程序繁琐，工作效率低，并且初代培养增殖率低，继代周期较长，导致繁殖速度缓慢，并且因长时间继代增殖而导致繁殖体玻璃化程度显著增高，再生种苗移栽成活率低，严重阻碍剑麻快繁种苗的产量和质量提高。剑麻组培快繁为保证繁殖种苗质量而必须在短时间内建立足够数量的无菌繁殖体，因此要消毒较多的珠芽材料，杀菌剂及无菌水等用量大，成本费用高，灭菌操作工作量大。

二氧化氯是目前国际上公认的的高效、广谱、快速、安全、无残留、不污染环境的第四代灭菌消毒剂，可杀灭一切微生物，包括细菌繁殖体、细菌芽孢、真菌、分枝杆菌和病毒等，且微生物不会产生抗药性。二氧化氯对微生物细胞壁有较强的吸附穿透能力，可有效地氧化细胞内含巯基的酶，还可快速地抑制微生物的蛋白质合成。灭菌效果比一般含氯消毒剂高2.5倍，而且在杀菌消毒过程中对人畜等高等生物无害，无致癌、致畸、致突变性，是一种安全、可靠的高效环保型杀菌消毒剂。

在农业领域二氧化氯已广泛用于禽畜饲养场舍及饮水的消毒、蚕茧养殖器具消毒、鱼虾疾病防治、池水消毒与增氧、杀灭毛蚶甲肝病毒及磨菇生产灭菌消毒保鲜处理，也有用于叶菜和鲜切花采收后灭菌保鲜储存处理。但少见有关二氧化氯在植物无菌培养技术方面的应用。

国内2006年首先报道了ClO₂对无籽西瓜种子进行表面消毒灭菌用于组培快繁研究，2009年梁钾贤等报道了用ClO₂对香蕉以吸芽为材料的外植体进行消毒灭菌取得了重大成功，并在香蕉种苗生产中取得了很好的效益。到目前为止，国内外利用ClO₂对剑麻外植体材料进行消毒灭菌的研究未见报道。

剑麻（Agavee sisalana Perr.ex Engelm）是一种热带多年生硬质纤维作物，其纤维色泽洁白，具有质地坚韧，拉力强，耐磨擦等众多优点，广泛应用于渔业、航海、工矿、运输、油田等行业，以及用于编织剑麻地毯、剑麻布、过滤器、工艺品等 。剑麻综合用途广，是宝贵的热作资源。

剑麻组培快繁，需要建立以珠芽茎尖分生组织为材料的无菌外植体，为保证繁殖种苗质量，必须建立足够数量的无菌外植体。因此要消毒较多的珠芽材料，杀菌剂及无菌水等用量大，成本费用高，灭菌操作工作量大。剑麻外植体的消毒通常采用1000mg/L的HgCl₂溶液浸泡20min，无菌水冲洗5次，消毒剂的Hg²⁺对环境和人体的毒性较大，使用时需要做足防护措施，程序繁琐，工作效率低，而且初代培养增殖率低，继代周期较长。采用ClO₂溶液对植物组织培养外植体材料消毒灭菌具有程序简单、环保无害、工作效率高等优点，为探讨应用ClO₂建立高效、环保的剑麻外植体的消毒方法，发明人对此进行了研究。

发明内容

本发明的目的在于针对剑麻外植体传统消毒技术，消毒剂的Hg²⁺对环境和人体的毒性较大，使用时需要做足防护措施，程序繁琐，工作效率低，而且初代培养增殖率低，继代周期较长等问题，提供一种具有方法程序简单、环保、高效，腋芽萌动生长快，初代繁殖系数高等特点的二剑麻外植体材料消毒的方法，该方法采用二氧化氯对剑麻珠芽外植体材料进行浸泡消毒。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

一种二氧化氯对剑麻外植体材料消毒的方法，包括如下步骤：

   （1）剑麻外植体材料的准备

选择剑麻的优良珠芽经培育生长有6~10片叶的植株，于晴天取回组培工作间，用水冲掉泥土和杂物后，切除根，环剥除叶片备用；

   （2）配制二氧化氯溶液

    按照使用量配制活化二氧化氯溶液, 二氧化氯溶液浓度为500-3000mg/L；

   （3）外植体消毒灭菌