[发明专利]壳聚糖改性的肝素锂抗凝添加剂的制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种壳聚糖改性的肝素锂抗凝添加剂的制备方法，以提高肝素锂与血液的相容性，并使溶解时间明显缩短。

【背景技术】

抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。能够阻止血液凝固的物质，称为抗凝剂或抗凝物质。常用抗凝剂有EDTA、草酸盐、枸橼酸盐和肝素盐。肝素可以加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。肝素是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂。目前采血管中作为抗凝剂添加的肝素盐常选用肝素锂盐，相比钠盐，锂的含量(3.5%～4.5%)比钠(9.5%～12.5%)少,减少了血中微纤维形成的可能，同时肝素锂盐的使用不影响其它生理学上的检测。但是肝素锂为干燥晶体，它与血液混合不好，同时由于大量肝素的使用，其在血液中的溶解较慢，血液为胶性液体，肝素锂的溶解性更慢，这就要求我们为获得一支抗凝效果好的采血管必须改善肝素锂的血溶解性。另外，肝素对已形成的血块无抗凝效果，所以肝素必须在血液凝固之前迅速溶解分布于血液中才能发挥抗凝作用。肝素是一种酸性粘多糖，其结构为由糖醛酸及右旋基葡萄糖交替连结而成；肝素分子结构中每个糖单元含有羟基、硫酸基、硫酸氨基等七个酸性基团，具有较强的酸性，为线性阴离子聚电解质。

层层静电自组装是一种新颖的高分子间连接技术,它利用不同种类高分子间的静电引力或氢键作用等特殊的作用力,形成两种或多种聚合物单分子层的层层叠加,所得的薄膜厚度极小(一般在几十个纳米)并兼具有各组分原本的一定功能性。目前利用层层静电自组装技术制备抗凝血生物材料的方法已有报道，但还没有出现一种利用该技术来制备用于采血管中的抗凝添加剂的方法。

如2003-10-15公开的，公开号为CN1448189A的中国发明揭示了一种采用静电自组装制备抗凝血生物材料的方法，它的步骤如下:1)采用表面改性方法在生物材料表面获得具有正电荷或负电荷的荷电表面;2)将由1)制备的荷电材料浸入浓度为0.01mg/ml-10g/ml的荷相反电荷的聚电解质水溶液中,吸附平衡5-60分钟,用蒸馏水洗涤,空气吹干;将干燥后的材料浸入浓度为0.01mg/ml-10g/ml的荷相反电荷的聚电解质水溶液中,吸附平衡5-60分钟,用蒸馏水洗涤,空气吹干;交替重复以上步骤获得含正负电荷聚电解质交替组装的多层涂层表面,涂层聚电解质包含一种或一种以上的带电抗凝血药物。该涂层聚合物是在水溶性条件涂层的,可实现对具有复杂体型结构的生物医用装置的涂层修饰,形成稳定的医用聚合物涂层,有效改善材料的抗凝血性。其中，所说的聚电解质为聚阴离子，包括白蛋白、肝素、磺化葡聚糖、尿激酶、透明质酸，聚苯乙烯磺酸钠、海藻酸钠的一种或多种混合物。所说的带电抗凝血药物，包括白蛋白、肝素、磺化葡聚糖、尿激酶、聚苯乙烯磺酸钠。

再如2005年10月的高等学校化学学报第26卷发表的“层层静电自组装构建壳聚糖/肝素抗菌多层膜的研究”也揭示了一种利用层层静电自组装技术制备抗菌多层膜的方法，其是以具有抗菌作用的壳聚糖作为聚阳离子、具有抗凝血性的肝素作为聚阴离子，采用层层静电自组装的方法构建具有抗凝血和抗感染协同作用的功能多层膜。其具体方法是：

1、准备试剂：PET片(厚度50μm,半透明);肝素(高分子量,山东福瑞达生物化工有限公司);壳聚糖(重均分子量41×104,青岛海汇有限公司);罗丹明标记壳聚糖是于4℃将2mg/mL罗丹明B异硫氰酸酯加入到015%(质量体积分数)的壳聚糖溶液中48h后得到的；

2、聚酯片的氨基化：先将聚酯片在索氏抽提器中用丙酮抽提7d,于30℃真空干燥24h至恒重,然后将处理过的聚酯片浸于37℃的0106g/mL己二胺(经精馏)异丙醇溶液中4h,使聚酯片表面共价结合上氨基,最后用三次蒸馏水充分漂洗,用同样的方法干燥.将聚酯片浸于1mol/L HCl中酸化20min,使聚酯片表面带一定量的正电荷；

3、层层静电自组装：将氨基化和酸化处理后的基材浸于1mg/mL的肝素溶液中(预先调节pH=318)15min,用pH=318的三次蒸馏水漂洗.再将聚酯片浸于1mg/mL壳聚糖溶液中(预先调节pH=318)15min,用pH=318的三次蒸馏水漂洗.重复上述过程若干次,最后将样品于30℃真空干燥48h.在紫外光谱测试时用罗丹明染色壳聚糖代替壳聚糖进行相同的组装。