[发明专利]一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法

权利要求书

1.一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、配制DNA浓度为0.2μM的DNA组装液，然后采用DNA组装液孵育清洗干净的QCM芯片，得到表面自组装DNA的QCM芯片；所述DNA为巯基修饰DNA，DNA序列为：5’-TCA CAG ATG AGT AAA AAAAAA AAA-3’；

步骤二、采用浓度为2μM的巯基聚乙二醇的乙醇溶液孵育步骤一中所述表面自组装DNA的QCM芯片使芯片表面的多余位点封闭；

步骤三、制备引发剂标记的DNA溶液；

步骤四、采用适配体DNA溶液和步骤三中所述引发剂标记的DNA溶液共同孵育步骤二中封闭后的QCM芯片，用缓冲溶液冲洗孵育后的芯片表面，得到固定有适配体DNA的QCM芯片；将所述固定有适配体DNA的QCM芯片装入石英晶体微天平的反应器中，然后向反应器中通入缓冲液，待基线平稳后，读取石英晶体微天平监测到的频率F1；所述适配体DNA的序列为ACT CAT CTG TGA ATC TCG GGA GAC AAG GAT AAATCC TTC AAT GAA GTG GGT CTC CC；所述缓冲液为0.1M pH值为7.0的PBS缓冲液；

步骤五、将步骤四中装入石英晶体微天平的反应器中的QCM芯片取出，氮气吹干后置于表面引发聚合反应液中，并将整个反应体系移至手套箱中，室温下反应2h～4h后将QCM芯片从表面引发聚合反应液中取出，用PBS溶液冲洗QCM芯片，然后用氮气吹干；

步骤六、将步骤五中吹干后的QCM芯片装入石英晶体微天平的反应器中，然后向反应器中通入缓冲液，待基线平稳后，读取石英晶体微天平监测到的频率F2，再向反应器中通入检测物，待石英晶体微天平频率变化曲线平稳后读取监测到的频率F3，计算频率F2和步骤四中所述频率F1的差值ΔF′，频率F2和频率F3的差值ΔF″，当ΔF″/ΔF′≥30%时判定检测物中含有可卡因；所述缓冲液为0.1M pH值为7.0的PBS缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，步骤一中所述DNA组装液由DNA、NaCl和浓度为0.1M的pH值为7.2的PBS缓冲液混合均匀制成，DNA组装液中NaCl的浓度为0.2M。

3.根据权利要求1所述的一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，步骤三中所述引发剂标记的DNA溶液的制备方法为：将10μL浓度为10mg/mL新鲜配置的NHS-酰溴溶液与5μL浓度为1M的pH值为9的NaHCO₃/Na₂CO₃溶液混合均匀，并加水稀释至40μL，随后加入3μL浓度为100μM的氨基修饰DNA，加水稀释至50μL，25℃下反应1h，随后将反应产物用含0.2M NaCl的浓度为0.1M的PBS缓冲溶液稀释至600μL得到引发剂标记的DNA溶液。

4.根据权利要求3所述的一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，所述氨基修饰DNA为5’氨基功能化DNA，DNA序列为5’-GTC TCC CGA GAT-3’。

5.根据权利要求1所述的一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，步骤四中所述适配体DNA溶液为含100μM适配体DNA的0.1M的PBS溶液，适配体DNA溶液与引发剂标记的DNA溶液的体积比为1∶25。

6.根据权利要求1所述的一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，步骤四中所述孵育的温度为25℃，孵育的时间为0.5h～2h。

7.根据权利要求1所述的一种利用石英晶体微天平检测可卡因的方法，其特征在于，步骤五中所述表面引发聚合反应液的制备方法为：配制去离子水与甲醇体积比为1∶1的混合溶液，向每升混合溶液中加入16mmol 2,2'-联吡啶、5mmol寡聚甲基丙烯酸寡乙二醇酯和5mmol甲基丙烯酸-2-羟基乙酯，混合均匀后加入0.004mmol的氯化铜和0.1mol氯化钠，得到淡蓝色溶液，对淡蓝色溶液除氧10min～30min，随后向每升除氧后的淡蓝色溶液中加入0.004mmol抗坏血酸，保持氮气氛围，得到红色的表面引发聚合反应液。