[发明专利]一种具有调节血糖活性乌饭树多糖的提取纯化方法

权利要求书

1.一种具有调节血糖活性乌饭树多糖的提取纯化方法，其特征是以乌饭树树叶为原料，经过粉碎、热水水提、乙醇沉淀，再经过大孔树脂和凝胶色谱分离纯化，最后用胰岛β-细胞膜色谱柱验证活性，得到具有调节血糖活性的乌饭树多糖；

具体工艺如下：

(1)原料粉碎：乌饭树树叶干燥，粉碎，过60-80目筛网，得到树叶粉末；

(2)热水提取：乌饭树树叶粉末加水，料液比控制在1∶40-1∶50，pH调节至9.0-9.5，温度调节至60-65℃，浸提时间为2-3h，4000r/min离心15min，取上清液，旋转蒸发浓缩得到浓缩液A；

(3)乙醇沉淀：浓缩液A与适量乙醇混合，调节至混合液中乙醇纯度为75-85％，沉淀时间为6-7h，4000r/min离心15min，取沉淀，加水复溶，得到浓缩液B；

(4)大孔树脂纯化：浓缩液B上大孔吸附树脂，先用2-3倍柱体积的去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用3-5倍柱体积的体积浓度为95％的酒精洗脱，收集洗脱液，浓缩至酒精含量不超过5％，得到浓缩液C；

(5)凝胶色谱纯化：浓缩液上凝胶柱，收集分子量在80-100KDa范围内的洗脱液，浓缩得到浓缩液D；

(6)胰岛β-细胞膜色谱柱验证活性：以处理好的载体细胞膜作为胰岛β-细胞膜色谱柱的固定相，流速为0.2mL/min，柱温为37℃，流动相为硫酸铵缓冲液。

2.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的乌饭树多糖的提取方法，其特征是：(1)大孔树脂是AB-8、D3520、D4020中的一种；(2)凝胶为Shodex OHPak SB-803HQ；(3)载体细胞膜的制备：在低温反应管中加入硅胶作为细胞膜的载体，加入细胞膜悬浮液适量，反应2h后，加入生理盐水，控制温度为25℃，使凝脂双层进行自身相互作用，最终在硅胶表面形成均匀的细胞膜，用Tris-HCl缓冲液洗涤。