[发明专利]通过基因枪介导红叶石楠叶片胚性愈伤组织遗传转化方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术领域或植物基因工程领域。具体说，涉及一种通过基因枪介导红叶石楠叶片胚性愈伤组织遗传转化的方法。

背景技术

红叶石楠是光叶石楠（P.glabra）和石楠（P.serralata）杂交选育的新品种，蔷薇科石楠属常绿小乔木（张虎,王润贤,邱国金,等.Tissue culture and rapid propagation of Photiniafraseri[J].Plant Physiology Communications.植物生理学通讯,2003,39(1):34(in Chinese)），是近年来我国引进的彩叶树种之一，其叶片表面光亮，幼叶鲜红，观赏性强，是不可多得的优良园林绿化树种，在我国南方广泛种植，但对于优良园林绿化树种来说，其最好的目的是：适合于全国不同地理环境栽植，即增加观赏性强的同时使之具有更强的耐寒性，因此，培育具有观赏性强并同时具有较强耐寒性的红叶石楠新品种就尤其重要。在林木上传统育种是个非常漫长的过程，植物基因工程的应用克服了传统育种方法的不足（Woodson W RBiotechnology of floricultural crops[J].HortScience,1991,26(8):1029~1033）。自1983年首次获得转基因植株以来，转基因技术已在多种植物上获得了成功(王关林,方宏均.植物基因工程原理与技术[M].北京:科学出版社,1998；梁慧敏,夏阳，孙仲序,等.根癌农杆菌介导苜蓿遗传转化体系的建立.农业生物技术学报,2005,13(2):152～156；夏阳,梁慧敏,孙仲序,等.四倍体刺槐转甜菜碱醛脱氢酶基因的研究.中国农业科学,2004,37(8):1208-1211；夏阳,王太明,梁慧敏,等.2007.农杆菌介导的国槐转基因及组培快繁方法.专利号:200710013185；Yan Li-Ping,XiaYang,Wang Fei,et al.Physiological Responses to Salt Stress of T2 Alfalfa Progenies carrying aTransgene for Betaine Aldehyde Dehydrogenase.Plant Cell,Tissue and Organ Culture.SCI；燕丽萍,夏阳*，毛秀红,等.转BADH基因紫花苜蓿山苜2号品种的抗盐性鉴定及系统.选育植物学报，2011,46(3):293-301；刘翠兰,燕丽萍,毛秀红,等.转BADH基因山苜3号(SLM07)紫花苜蓿新品种选育.中国草地学报,2011,33（3）:6-11)，有关红叶石楠的研究也仅限于组织培养方面，植株的体细胞胚再生体系建立和遗传转化的报道不多(方敏彦,梁慧敏,夏阳,燕丽萍,刘翠兰.红叶石楠离体植株再生频率的影响因素研究.西北植物学报,2012,32（2）:0403-0408；梁慧敏,刘翠兰,夏阳,燕丽萍,方敏彦.红叶石楠离体叶片体细胞胚诱导快繁培养基.专利号:201110033598.0；Rafael Ramirez-Malagon1,Anatoli Borodanenko1,Jose Luis Barrera-Guerra1& Neftali Ochoa-Alejo.1997.Micropropagation for fraser photinia(Photinia fraseri)Plant Cell,Tissue and Organ Culture,48:219-222)。红叶石楠在根癌农杆菌介导下最终转化体极少，因红叶石楠叶片被农杆菌(Agrobacterium tutnefaciens)侵染后，农杆菌难以被抑制所造成的(刘翠兰,夏阳,燕丽萍,等.四倍体刺槐、国槐和红叶石楠对根癌农杆菌菌株及不同抗生素敏感性研究.山东林业科技,2010,190（5）:20-23)。再加上内生菌(endophyticalbacteria)的污染，许多研究表明，植物组织中普遍存在内生菌，当植物组织进行离体培养时，这些内生菌就会产生污染，内生细菌引起的危害是在早期导致培养失败，在后期导致试管苗移栽困难和死亡(周俊辉，周厚高,刘花全.植物组织培养中的内生细菌污染问题[J].广西植物.2003,23(01):41-47)。鉴于农杆菌(Agrobacterium tutnefaciens)进行红叶石楠叶片的遗传转化是无效的，因此利用基因枪法就可以避免上述问题：不同菌叠加污染的发生。