[发明专利]识别N-乙醇酰GM3神经节苷脂的重组抗体和片段以及其在肿瘤诊断和治疗上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域和特别是使用基因工程技术获得较少免疫原性的免疫球蛋白以用于癌症治疗方面。本发明特别地涉及编码识别抗原的单克隆抗体或其衍生片段的肽序列，所述抗原包含N-乙醇酰GM3神经节苷脂，但不包括其它相关的神经节苷脂如N-乙醇酰或N-乙酰，和硫酸化糖脂。 

发明背景 

神经节苷脂是包含唾液酸的糖鞘脂并且其存在于脊椎动物的质膜中(Stults CLM等人，Methods Enzymology 179：167-214，1989)。在文献中已报道了这些分子中的一些是肿瘤相关抗原或肿瘤标记(Hakamori SH：Curr Opin Immunol 3：646-653，1991)，然后描述了抗神经节苷脂抗体在癌症的诊断和治疗中的用途(Hougton AN等人，NAS USA 82：1242-1246，1985；Zhang S等人Int J Cancer 73：42-49，1997)。哺乳动物中更普遍的唾液酸是N-乙酰(NAc)和N-乙醇酰(NGc)(Corfield AP等人，Cell Biol Monogr 10：5-50，1982)。通常NGc不在人和鸡正常组织中表达但其广泛地存在于其它脊椎动物中(Leeden RW等人，Biological Role of Sialic Acid.Rosemberg A和Shengtrund CL(Eds)Plenum Press，New York，1-48，1976，KawaiT等人，Cancer Research 51：1242-1246，2001)。然而来自文献的报道显示抗NGc抗体识别一些人肿瘤和肿瘤细胞系(Higashi H等人，Jpn J.Cancer Res.79：952-956，1988，Fukui Y等人，BiochemBiophys Res Commun 160：1149-1154，1989)。已在人乳腺癌中发现GM3(NGc)神经节苷脂水平的增加(Marquina G等人，Cancer Research 56：5165-5171，1996)，所述发现使得该分子作为癌症治疗的靶标的用途非常具有吸收力。 

提交的专利EP0972782 A1描述了由根据Budapest条约保藏的保藏号为ECACC 98101901的杂交瘤产生的鼠科动物单克隆抗体。该单克隆抗体具有IgG1同种型并通过免疫Balb/c小鼠产生，所述小鼠用疏水地缀合低密度脂蛋白(VLDL)的NGcGM3神经节苷脂和在弗氏佐剂存在的情况下进行免疫，所述抗体优选地结合NGcGM3神经节苷脂和识别在人乳腺和黑素瘤肿瘤中表达的抗原。(Carr A等人，Hybridoma19：3：241-247，2000)。该抗体对含有所述序列的细胞表现出很强的细胞溶解活性，这可以使其成为治疗工具。 

此外已知由肿瘤诱导的新血管形成在肿瘤生长的控制中构成了其中一个主要参数。该参数已指导研究朝向寻找涉及抗原过程抑制的新的治疗武器。存在涉及该过程的14F7抗体功效的实验证据。已在基质凝胶测定中发现所述证据(Angiogenesis.第4卷，Pags.113-121，2001；Anti-Cancer Res.第18卷，Pags.783-790，1998)。基质凝胶是基底膜蛋白和围绕内皮细胞的细胞外基质的混合物。其在新血管形成过程中的有效性在于在新血管发育期间内皮-基质相互作用的生理学重要性。同样，该凝胶的组分例如层粘连蛋白被认为是该过程的重要标记。 

该模型类型也已用于涉及肿瘤诱导的血管发生的机制的研究中，允许评估能够调节直接涉及肿瘤的事件因而影响其生长和转移的药物。 

使用非人单克隆抗体例如鼠科动物14F7对人的治疗具有某些不利方面，特别是在反复的治疗方案中。例如鼠科动物单克隆抗体具有相对较短的血液半衰期。此外在用于人时，其丧失了重要的免疫学特性例如效应物功能。 

并且更重要的是，鼠科动物单克隆抗体包含相当多的当注射入人时产生免疫原性的氨基酸序列。大量研究已表明在施用外源抗体后在患者体内产生的免疫应答可以相当强烈并且在最初的治疗后基本上消 除了抗体的治疗功效。此外，甚至在用鼠科动物单克隆抗体对患者进行治疗后，用非相关的鼠科动物抗体进行的后续治疗可能会无效和甚至会因为称作HAMA应答(Khazaeli，M.B.，等人，Journal ofImmunotherapy 15：42-52，1994)的交叉反应性而造成危险。