[发明专利]鸭瘟病毒gE蛋白基因及其应用

说明书

技术领域

本发明属于家禽基因工程疫苗技术领域，具体涉及一种鸭瘟病毒gE蛋白基因及其应用。

背景技术

近年来我国水禽养殖业发展迅猛，存栏量和出栏量长期保持世界第一的位置，到2010年仅肉鸭的出栏量就达到20.84亿只。但随着集约化、规模化养殖的发展，各种疾病常导致鸭群大面积死亡，仅2010年因鸭群各种疾病累计造成直接和间接养殖经济损失50亿元。在鸭的多种常发疾病中，鸭瘟流行广泛，传播迅速，发病率高，病死率大，病死率通常在90％以上，对水禽业发展危害极大。初步估计鸭瘟作为鸭群养殖的常见病多发病其常规预防和治疗用药在国内每年至少拥有15亿元销售市场。目前，临床上常用鸭瘟弱毒疫苗来预防鸭瘟疾病，并取得一定的临床效果。但是弱毒疫苗的应用带来的副作用也相对比较突出，比如弱毒疫苗存在毒力返强的风险、临床难以区分野毒和疫苗毒、无法根除鸭瘟疾病等。因此，临床急需开展鸭瘟基因工程标记疫苗的研究来改进上述疫苗的缺点，为彻底根除水禽业的鸭瘟疾病打下基础。

病原鸭瘟病毒（Duck Plague Virus）属于疱疹病毒科疱疹病毒属中的滤过性的病毒。鸭瘟病毒的DNA具典型的疱疹病毒DNA的特征，大小约为150kb，两端为末端重复序列，中间有内部重复序列。囊膜蛋白为疱疹病毒的主要保护性抗原，它在介导病毒进入细胞，以及病毒的成熟与释放中均起重要的作用。疱疹病毒gE基因是疱疹病毒从视网膜、嗅觉上皮细胞、三叉神经节侵入中枢神经组织所必需的毒力基因，对疱疹病毒在体内毒力表达、侵袭神经和沿着神经传递起着决定性的作用。疱疹病毒gE蛋白对于病毒感染及复制都是非必需的。疱疹病毒中，囊膜糖蛋白不仅介导病毒对靶细胞的感染而且还是被感染的宿主免疫系统识别的主要抗原。随着DNA重组技术的发展和利用，基因工程疫苗的研究取得了快速发展，其中亚单位疫苗成为当前新型疫苗的研究热点。通过基因工程制备的鸭瘟gE 蛋白亚单位疫苗，成本较低且蛋白质量稳定，并且可以激发机体的免疫应答，无疑具有重要的现实意义和市场开发价值。但是，目前鸭瘟gE 蛋白的重组表达效率很低，难以满足实际生产的需求。 

发明内容

本发明的目的是提供一种鸭瘟病毒gE基因及其应用，即一种能够高效表达鸭瘟病毒gE蛋白的核苷酸，及其作为疫苗的应用。

本发明一个方面提供一种用于编码鸭瘟病毒gE蛋白的核苷酸，其序列为SEQ ID NO：1。

本发明还涉及上述序列为SEQ ID NO：1的核苷酸的互补序列。

本发明提供一种表达载体，所述的表达载体所携带有上述的核苷酸。

上述的鸭瘟病毒gE蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。

本发明的鸭瘟病毒gE蛋白在制备鸭瘟病毒基因工程亚单位疫苗中的应用。

本发明获得的鸭瘟病毒基因工程亚单位疫苗经肌肉接种10日龄鸭瘟病毒阴性鸭，接种14日后取血测鸭瘟抗体，免疫组鸭瘟抗体全部为阳性，有效率达到100%，而对照组未检测到抗体。结果显示制备的重组蛋白免疫原性良好，其进一步制备的鸭瘟病毒基因工程亚单位疫苗可以引起鸭的免疫应答。

附图说明

图1：gE基因优化前后表达量比较的Western印迹图。

具体实施方式

 本发明优化得到了表达量高的鸭瘟病毒gE基因，基因表达获得重组蛋白具有很好的抗原性，可以防御鸭瘟病毒，从而促成了本发明。

本发明依赖于在遗传工程和分子生物学领域使用的常规技术和方法。下列资源包括了对本发明有用的一般方法学的描述：Sambrook et al.,MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL (2nd Ed., 1989)；Kreigler、GENE TRANSFER AND EXPRESSION; A LABORATORY MANUAL(1990) and Ausubel etal.,Eds. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(1994)。这些一般性参考文献提供了本领域技术人员已知的定义和方法。

一、鸭瘟病毒gE基因的密码子优化

由于目前已知序列的猪瘟病毒的gE基因序列高度保守，因此选择鸭瘟Anatid herpesvirus1株的gE基因序列进行密码子优化，应用在原核细胞中的优势密码子，减少稀有密码子造成的外源蛋白低表达甚至不表达的发生。优化后的gE基因核苷酸序列为SEQ ID NO：1，其翻译的氨基酸序列为SEQ ID NO：2。将优化后的gE基因序列送基因公司进行全基因合成。