[发明专利]一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物发酵生产薯蓣皂素的方法

权利要求书

1.一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物发酵生产薯蓣皂素的方法，其特征是：将黄姜干粉和自来水按质量体积比1：5~12的比例混合，并补入为黄姜干粉质量4.0%的尿素、为黄姜干粉质量1.0%的酵母提取物和为自来水体积0.2%的无机盐，配成转化浆液，接入体积约为自来水体积5%的芽孢杆菌属(Baccilus)菌株XBT2011种子液，在培养温度40℃,控制pH 6.0, 搅拌速度为300~400rpm，通气条件为2.5~ 4.0 l/min的培养条件下转化56~72hrs，转化浆液经过滤,干燥得到水解物，水解物用一倍体积的120﹟汽油提取12-16hrs,经反复结晶得到薯蓣皂素成品；所述的rpm为转/分钟，hrs为小时；所述芽孢杆菌属(Baccilus)菌株XBT2011的保藏号：CGMCCNo.6301。

2.根据权利要求1所述的一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物转化生产薯蓣皂素的方法，其特征是：在转化过程中，每隔6hrs从发酵罐中取5ml转化液检测薯蓣皂素转化情况；向液样中加入2倍液样体积的水饱和正丁醇试剂,超声波超声20min后高速离心5min, 取上清液至坩埚中于100℃烘干,再向坩埚中加一倍液样体积的甲醇溶液，经反复溶解后过滤，取适量滤液点样于薄层层析板上，用体积比为7 ：3 ：0.5的氯仿/甲醇/水展开剂展开, 喷10ml质量百分比浓度10% H₂SO₄ 溶液加热显色,与薯预皂苷元标品对照，观察薯蓣总皂苷的水解程度和薯蓣皂苷元转化程度；培养浆液经工业滤布过滤,于85℃烘干得到水解物，水解物用约一倍体积的120﹟汽油提取12-16hrs,并添加工业用活性炭除色素，经反复结晶得到薯蓣皂素成品。

3.根据权利要求1或2所述的一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物转化生产薯蓣皂素的方法，其特征是：该方法中所得水解物干重，为所添加黄姜干粉干重28～33%，薯蓣皂素得率在2.7～3.05%。

4.根据权利要求1所述的一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物转化生产薯蓣皂素的方法，其特征是：所述的无机盐为N_aCl、MgSO₄、k₂HPO₄ 、FeSO₄ 和CaCl₂的混合物。

5.根据权利要求1或4所述的一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物转化生产薯蓣皂素的方法，其特征是：所述的无机盐是由质量体积百分比分为0.1% N_aCl、0.05%MgSO₄、0.05%k₂HPO₄、0.005%FeSO₄和0.001%CaCl₂组成。

6.根据权利要求1所述的一种由盾叶薯蓣-黄姜经微生物转化生产薯蓣皂素的方法，其特征是：所述种子液的制备为取5ml菌体密度在10⁸ ～10⁹/ml的Bacillus aryabhattai XBT2011悬液接种于150ml种子培养液中，在40℃,200rpm的摇瓶培养条件下培养14hrs制得；其中所述的种子培养液是由以下成分按下述质量体积百分比组成：黄姜干粉5%、尿素0.3%、酵母提取物0.1%、N_a Cl 0.1%、MgSO₄ 0.05%、k₂HPO₄ 0.05%、FeSO₄ 0.005%、CaCl₂ 0.001%。