[发明专利]一种制备高纯度β-聚苹果酸的方法

权利要求书

1.一种制备高纯度β-聚苹果酸的方法，包括菌种活化、种子培养、发酵培养及分离纯化，其特征在于，所述分离纯化方法如下：

a、普兰多糖的去除：将出芽短梗霉发酵培养后，离心除去菌体，加入甲醇或乙醇，加入量占加入后总液体体积的25％，用玻璃棒搅拌，玻璃棒上缠绕的絮状物即为普鲁兰多糖，将其移除；

b、聚苹果酸粗品的提取：向a得到的液体中继续添加甲醇，使甲醇的总含量达到总液体体积的60％，将上清液移除，向沉淀中再加入甲醇，洗涤沉淀，离心后将沉淀物收集，冷冻干燥得白色样品；

c、样品中难分离多糖的去除：将b中得到的白色样品加水溶解，加入2-10％(v/v)的普鲁兰酶，60℃反应30-60min，冷却，加入甲醇，使甲醇的总含量达到总液体体积的60％，进行醇沉；离心收集沉淀物，冷冻干燥，即可得到纯度为80％以上的β-聚苹果酸盐白色粉末；

d、将c中得到的白色粉末再次溶到水中，以2Bv/h的流速过强酸性阳离子交换树脂，得到含有β-聚苹果酸的溶液，将其冻干即得到纯度为80％以上的β-聚苹果酸。

2.根据权利要求1所述的一种制备高纯度β-聚苹果酸的方法，其特征在于，洗涤沉淀时所述甲醇的加入量为沉淀体积的2～3倍，洗涤次数为1～3次。

3.根据权利要求1所述的一种制备高纯度β-聚苹果酸的方法，其特征在于，所述分离纯化方法如下：

a、普兰多糖的去除：将出芽短梗霉TKPM00006发酵培养后，离心除去菌体，加入甲醇，加入量占总液体体积的25%，用玻璃棒搅拌，玻璃棒上缠绕的絮状物即为普鲁兰多糖，将其移除；

b、聚苹果酸粗品的提取：向a得到的液体中继续添加甲醇，使甲醇的总含量达到总液体体积的60%，将上清液移除，向沉淀中再加入2倍体积的甲醇洗涤沉淀3次，离心收集沉淀，冷冻干燥得白色样品；

c、样品中难分离多糖的去除：将b中得到的白色样品加水溶解，加入5%的普鲁兰酶，60℃反应60min，冷却，加入甲醇，使甲醇总含量达到总液体体积的60%，进行醇沉；离心收集沉淀物，冷冻干燥，即可得到纯度为80%以上的β-聚苹果酸盐白色粉末；

d、将c中得到的白色粉末再次溶到水中，以2Bv/h的流速过001*7树脂，得到含有β-聚苹果酸的溶液，将其冻干即可得到纯度为80%以上的β-聚苹果酸。