[发明专利]编码乙型肝炎病毒核心蛋白的核酸分子和包含其的疫苗

说明书

发明领域

本发明涉及编码乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白及其片段的核酸序列；涉及乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白及其片段、涉及改进的HBV疫苗、用于诱导针对HBV的免疫反应的改进方法以及用于预防地和/或治疗地使个体针对HBV免疫的改进方法。

发明背景

本申请要求2011年2月11日提交的美国临时专利申请号61/442,162的优先权，所述专利申请以引用方式并入本文。

乙型肝炎是全球范围内流行的常见感染，其导致了肝硬化、肝功能衰竭以及肝细胞癌的发展。显著数量的肝炎病例未被报道出来是因为所述疾病的无症状特性。虽然如此，每年仍报道了约3.5亿慢性乙型肝炎病例。大部分肝炎感染的人群是在不发达国家或者发展中国家。

所述病毒基于其包膜蛋白上存在的抗原表位而被分为四种主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)。根据基因组序列的变化，HBV存在至少八种基因型(A-H)。HBV的替代基因型具有流行的地理分布。

表1是HBV基因型的地理分布。

表1-HBV的地理分布

医学病毒学杂志(J.Med.Virol)，DOI 10.1002jmv

HBV基因组是环形DNA分子，所述分子主要是双链但该双链具有由比另一链更长的一链产生的单链区域。所述双链区域由约3020个核苷酸的较短链的一条链与约3320个核苷酸的较长链杂交而产生。在所述较长链的非杂交核苷酸上的单链区域与HBV DNA聚合酶相缔合。HBV基因组DNA和HBVDNA聚合酶两者都包含在由多个HBV核心蛋白(HBcAg)分子形成的核蛋白壳内。HBV核心蛋白由HBV表面蛋白质(HBsAgs)和脂质分子包膜。

所述HBV基因组含有四个开放阅读框架(ORF)：1)编码HBVDNA聚合酶的ORF，2)具有两个起始密码子的ORF，其中连接到第二个起始密码子的序列编码核心蛋白并且包括另一个上游起始密码子的序列编码被称为pre-C的序列；3)具有三个起始密码子的ORF，其中一个编码表面蛋白质(gp27)、一个包括编码被称为pre-S2(gp36)的序列的上游起始密码子，并且另一个包括编码被称为pre-S1(gp42)的序列的更上游的起始密码子；以及4)编码HBxAg的ORF，所述HBxAg是功能较少被了解的蛋白质。

用于HBV感染的预防疫苗和治疗涉及注射从慢性携带者的血浆中纯化的亚病毒颗粒或在稳定转染的真核细胞系中作为重组蛋白质而被产生的亚病毒颗粒。所述亚病毒颗粒是病毒蛋白质，并且这些疫苗通常被称为亚单位疫苗。HBV蛋白被施用给个体并变为个体的免疫系统的靶标。在未感染的个体中，针对亚单位疫苗的免疫反应保护所述未感染个体免受HBV感染。在感染个体中，由疫苗诱导的免疫反应可以具有治疗效果。

奇萨利·F.V.(Chisari F.V.)，美国病理学杂志(Am J Pathol.)，2000.156:1117-1132和帕巴斯·P.(Pumpeus P.)等国际病毒学(Intervirology)2001.44:98-114公开了HBV基因组结构。迪奈·P.(Deny P.)和F.·邹莉(F.Zoulim)，病理学与生物学(Pathologie Biologie)2010，8月，58(4):245 53讨论了乙型肝炎病毒的诊断和治疗。麦克·M.L.(Michel M.L.)和P.·蒂奥莱(P.Tiollais)，病理学与生物学2010，8月，58(4):288 95讨论了乙型肝炎疫苗以及它们的保护功效和治疗潜能。PCT公布W02004026899公开了含有具有HBV氨基酸序列的多肽序列的免疫原的用途。PCT公布的申请W02008093976公开了包括包含重组全长HBV表面抗原和HBV核心抗原的疫苗的HBV编码序列、蛋白质和疫苗。整个HBV表面抗原由三种类型的表面蛋白质(L蛋白、M蛋白和S蛋白)组成。PCT公布的申请W02009130588公开了包括编码乙型肝炎病毒核心抗原的核酸的HBV编码序列、蛋白质和疫苗，所述核酸是被优化来用于在人中表达的密码子。PCT公布W02010127115公开了使用重组载体递送HBV序列。