[发明专利]纳米银团簇在检测次氯酸含量的应用及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光检测方法，具体而言是一种将纳米银团簇作为荧光探针应用于检测氯酸含量的方法。 

背景技术

有机生命体在有氧新陈代谢过程中会产生次氯酸自由基（HClO）。这种内源性次氯酸是在髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）催化下，通过过氧化氢氧化体内的氯离子而产生的。在人体日常的新陈代谢过程中，次氯酸起着重要的作用，例如宿主防御、杀死入侵体内的病原体等。在医学领域，体内次氯酸的含量也被作为一种病理指标，用于一些像老年痴呆症、动脉粥样硬化、炎症、心血管疾病、癌症器官移植排斥反应等疾病的分析。因此，生命体系中次氯酸的检测对于上述多种疾病的防治具有重要的意义。在疾病的早期诊断、治疗以及生命科学的研究中需要准确的获得次氯酸的浓度。 

荧光光谱测定法具有灵敏度高、方法简单、价格低廉等优点，在测定离子方面尤其是生物体内的离子含量方面展现出重要的应用价值。 

近年来，一些基于有机染料被次氯酸氧化从而造成其荧光猝灭或者产生的原理而被开发成为荧光探针用于次氯酸的检测的文献和专利已有报道。然而这些有机荧光探针也有一些缺点，例如：荧光激发光谱窄、宽发射峰、荧光稳定性差、斯托克位移小、对氧敏感、容易光漂白等。 

半导体量子点（QDs）作为一种新型的荧光纳米材料具有很多独特且优异的光学性质，如耐光漂白能力强、化学稳定性好、吸收光谱宽、发射光谱窄、发射波长可调等优点，可以避免有机荧光探针的缺点。目前，研究人员们发现具有核壳结构的硒化镉（CdSe）半导体量子点的荧光发射强度对次氯酸存在很强的敏感性，因此已经被开发成为一种荧光探针用于细胞及生物体内的次氯酸浓度的检测。然而，半导体量子点也存在一些缺点，例如：毒性较大、尺寸较大（通常为10 ~ 20 nm）、强分子冥律间歇现象等。这些缺点也限制了其在生物领域的进一步应用。 

因此，我们需要一种操作简单、成本较低的方法用于样品中次氯酸的检测。该方法不仅可以克服传统荧光染料激发光谱窄、斯托克位移小、光稳定性差、激发波长受限等不足之处，还具有半导体量子点所不具有的优势。 

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种采用无毒，且生物相容性好的纳米银团簇作为探针，用于检测生命体系中次氯酸浓度的新方法。该方法的特点是：简单、易于操作，对次氯酸的定量检测具有良好的灵敏性和选择性。 

为实现上述目的，所采取的技术方案是： 

一种检测次氯酸含量的方法，以纳米银团簇溶液作为探针，通过荧光光谱检测次氯酸含量。

在本发明一实施例中，所述方法是：取0.2 ml~0.5 ml pH值为7.4的纳米银团簇溶液作为探针，在pH值为7.4的缓冲溶液下与待测溶液混合并静置15~30 min，用荧光光谱仪在37℃下检测混合溶液在637 nm处的荧光强度。 

在本发明一实施例中，所述荧光光谱仪的激发波长设置为510 nm、激发狭缝宽度为2 nm、发射狭缝宽度为3 nm。 

在本发明一实施例中，所述缓冲溶液为PBS缓冲溶液。 

在本发明一较优实施例中，提供一种检测次氯酸含量的方法，所述方法具体包括： 

（1）制备纳米银团簇溶液：

以聚甲基丙烯酸钠为模板，以硝酸银溶液为银源，两者混合后将所得混合液pH值调节为4.5；然后，将所述混合液置于紫外灯下并不断搅拌，用365 nm的紫外光进行照射70 min，获得具有强荧光的水溶性纳米银团簇溶液；调节获得的纳米银团簇溶液的pH值为7.4；

（2）绘制标准曲线并获得线性回归方程式

取0.2 ml~0.5 ml 步骤（1）获得的pH值为7.4的纳米银团簇溶液作为探针，在pH值为7.4的PBS缓冲溶液缓冲条件下，与次氯酸标准溶液混合；调节混合液中次氯酸的浓度依次为：0、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24 μmol/L；静置15~30 min后，用荧光光谱仪在37℃下分别检测上述各混合液在637 nm处荧光强度，获得相对荧光强度与次氯酸浓度的标准曲线；根据所得标准曲线，获得荧光强度与次氯酸浓度的线性回归方程式；

（3）检测

取0.2 ml~0.5 ml pH值为7.4的纳米银团簇溶液作为探针，在pH值为7.4的缓冲溶液下与待测溶液混合并静置15~30 min，用荧光光谱仪在37℃下检测混合溶液在637 nm处的荧光强度；

（4）计算

将步骤（3）检测到的荧光强度代入步骤（2）获得的线性回归方程式，计算得到待测溶液的次氯酸浓度；