[发明专利]一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基

说明书

技术领域

 本发明涉及大蒜组织培养技术，属于农业技术领域，具体地说是一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基。

背景技术

大蒜，多年生草本植物，百合科葱属。地下鳞茎分瓣，按皮色不同分为紫皮种和白皮种。辛辣，有刺激性气味，可食用或供调味，亦可入药。大蒜营养丰富：每100克含水分69.8克，蛋白质4.4克，脂肪0.2克，碳水化合物23.6克，钙5毫克，磷44毫克，铁0.4毫克，维生素C3毫克。此外，还含有硫胺素、核黄素、尼克酸、蒜素、柠檬醛以及硒和锗等微量元素。含挥发油约0.2%，油中主要成分为大蒜辣素，具有杀菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解产生。尚含多种烯丙基、丙基和甲基组成的硫醚化合物等。蒜中含有“蒜胺”，这种物质对大脑的益处比维生素B，还强许多倍。

植物受创伤后，在伤面新生的组织称为愈伤组织。植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果，而是利用外源的植物激素类物质诱导细胞开始分裂形成的，常用的有生长素类物质如2，4-=氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸和细胞分裂素如6苄基嘌呤等。生长素和细胞分裂素按一定浓度和比例配合使用，易于诱导出愈伤组织。

目前，通过组织和器官培养技术，仅在少数几种葱属植物上建立起了离体再生体系。大蒜属无性繁殖作物，绝大多数蒜种表现出很强的不结实性。生产上均采用传统的地方品种和自然变异的大蒜品种培植，很难获得或创造可育的大蒜材料进行有性杂交育种。但随着新的育种技术发展，人工诱变、原生质体的分离和融合以及组织培养等新的手段相继涌现，使大蒜的育种工作取得了很大的进展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，克服大蒜鳞茎尖组织诱导率低的问题，本发明方法利用高效诱导的培养基，用于大蒜的科研和生产。

为实现上述目的，本发明所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其特征在于：该大蒜愈伤组织诱导的培养基是将氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于基本培养基MS中而成的，其各组份的用量为：以1L基本培养基MS加入量计：MS 1L、氯吡脲 1.0～2.Omg、复硝酚钠 0.05～0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g。

本发明所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其实现方式如下：

一、供试植物材料采用市场购买的破除休眠期的普通白皮大蒜，该实验多用氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白均为北京索莱宝科技有限公司产品，实验所用其他试剂均为国产分析纯；

二、去白皮大蒜将蒜瓣剥开后置于直径12cm的培养皿中，下垫5层纱布，用水浸湿，将剥好的蒜瓣放置于纱布上，25℃水培法生根，每天早晚各换水1次；

三、去生长健壮的新鲜根尖3～5mm用大量清水冲洗，之后用75%酒精浸泡10～15s，再放入0.1%氯化汞7～8min，之后用大量无菌水冲洗8～10次以除去残留消毒液；

四、将消毒后的上述外植体接于含有氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS的培养基上，所述培养基为以1L基本培养基MS加入量计：MS 1L、氯吡脲 1.0～2.Omg、复硝酚钠 0.05～0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g；pH值调整为5.8～6.0。

所述原料中，MS为基本培养基，提供培养组织生长发育所需的无机营养和部分有机营养元素：氯吡脲和复硝酚钠是植物生长调节剂，具有促进培养组织形成胚性愈伤组织的作用；水解酪蛋白提供有机多肽类营养元素；蔗糖提供培养组织生长发育所的碳素营养：琼脂主要作用是固化培养基，起支撑作用。

所述培养基的制作方法是将氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS，搅拌均匀，pH值调整为5.8～6.0之间即可。

所述氯吡脲是一种高活性的苯基脲类衍生物，具有细胞分裂素活性。有促进细胞分裂和扩大、器官形成和蛋白质的合成、提高光合作用效率、增强抗逆性、延缓衰老、在瓜果植物上可促进花芽分化，保花保果，提高坐果率、促进果实膨大等作用。

所述复硝酚钠是一种强力细胞赋活剂，与植物接触后能迅速渗透到植物体内，促进细胞的原生质流动，提高细胞活力。