[发明专利]基于干细胞分泌因子的培养基及其制备和使用方法

权利要求书

1.基于干细胞分泌生物活性因子的培养基，其制备方法包括：提取干细胞、体外培养、扩增传代、收集细胞培养上清液；-20℃保存、融化上清液并混合、低温分离、超滤和浓缩，得到高纯度的富含多种生物活性因子的浓缩物添加剂；完全培养基的制备。特征是干细胞分泌生物活性因子来源于人脐带、羊膜、骨髓、脐血、胎盘和脂肪等组织的间充质干细胞，其富含多种生物活性因子和粘附、基质因子等物质。

2.根据权利要求1，所述的基于干细胞分泌生物活性因子培养基的制备方法，其特征在于干细胞是来源于健康人的脐带、羊膜、骨髓、脐血、胎盘和脂肪等组织的间充质干细胞。

3.根据权利要求1，其特征在于，所述的干细胞体外培养，扩增传代所用培养基为胎牛血清培养基、人血清培养基、人富血小板血浆、人血小板裂解液和化学成分明确的无血清培养基等。

4.根据权利要求1，所述的收集的细胞培养上清液经过混合、低温分离、超滤和浓缩，处理方法为3K的超滤膜过滤，体积浓缩1/10，除去酚红，保留生物活性物质。

5.基于干细胞分泌生物活性因子的培养基的使用方法，特征是将超滤浓缩得到的富含多种生物活性因子的浓缩物根据蛋白浓度，以0.1-10mg/mL的比例添加到基础培养基中，可用于多种细胞的培养。

6.根据权利要求5，所述的超滤浓缩物蛋白浓度为1-100mg/mL。

7.根据权利要求5，所述的基础培养基为DMEM/F12、IMDM、DMEM、α-MEM，优选IMDM。

8.根据权利要求5，所述的超滤浓缩物添加到基础培养基中的终蛋白浓度为0.1-10mg/ mL，优选0.5-5mg/ mL。

9.根据权利要求5，所述的细胞培养包括各种来源的MSC的原代分离和传代培养、人脐静脉血管内皮祖细胞（HUVEC）和人正常肝细胞LO₂的生长。