[发明专利]微生物聚集体定量显微成像测定及评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物处理中微生物聚集体性能的测定和评价方法，具体地说是涉及一种利用定量显微成像技术和模糊模式识别的方法测定和综合评价微生物聚集体性能的方法。

背景技术

微生物聚集体主要以活性污泥、生物膜、颗粒污泥等形式出现，是污水生物处理的主体，微生物聚集体的性能决定了污水净化以及固液分离的效果。

在污水生物处理过程中，通过细菌、真菌和原生动物等微生物的大量繁殖，加上污水中有机和无机胶体以及悬浮物等组成一种肉眼可见的绒絮状泥粒即为微生物聚集体，其对污水中污染物有很强的吸附能力和降解能力，颜色主要有深灰、灰褐、灰白等，大小约为0.02mm～0.2mm，表面积为20～100cm²/L，比重值稍大于水，静置时会发生沉淀。污水生物处理能力与其微生物聚集体的组成和结构密切相关，而水温、pH值、溶解氧等环境因素对微生物聚集体的新陈代谢有着重要的影响。

目前，对微生物聚集体性能的监测分析方法大都停留在定性观察阶段，采用主观指标进行判断，如松散程度，相对大小等等。也有研究尝试使用单个指标进行微生物聚集体的定量表征，如个体大小等，但是均停留在单因素评价的方面。目前针对微生物聚集体还没有精确定量的综合评价方法。

发明内容

本发明是为避免上述现有技术所存在的不足之处，提供一种微生物聚集体定量显微成像测定及评价方法，以便能够高效、准确地实现对微生物聚集体的定量分析和综合评价。

本发明为解决技术问题采用如下技术方案：

本发明微生物聚集体定量显微成像测定及评价方法，其特点是按如下步骤进行：

a、按如下步骤标定待测微生物聚集体样本的灰度值与比重值标准关系曲线：

a1、以1.0°Bx为糖度梯度，取糖度从5.0°Bx到21.0°Bx的蔗糖水溶液共17组，标记为蔗糖水溶液m，m=1，2，…，17；

a2、从待测微生物聚集体样本中取含有微生物聚集体的混合液，测试所述混合液的质量浓度值，记为p，以蒸馏水作为溶剂将所述混合液稀释到质量浓度值为p/100，获得待标定混合液样本；

a3、使用胶头吸管从待标定混合液样本中吸取一个微生物聚集体，将所述微生物聚集体无初速滴入蔗糖水溶液1中，静置30秒；若所述微生物聚集体在所述蔗糖水溶液1中悬浮，则将蔗糖水溶液1的糖度标记为所述微生物聚集体的比重值，否则，将其取出并无初速滴入蔗糖水溶液2中，静置30秒，若所述微生物聚集体在所述蔗糖水溶液2中悬浮，则将蔗糖水溶液2的糖度标记为所述微生物聚集体的比重值，否则，将其取出并无初速滴入蔗糖水溶液3中，静置30秒，……以此类推，直到所述微生物聚集体在蔗糖水溶液m中悬浮，将蔗糖水溶液n的糖度标记为所述微生物聚集体的比重值；

a4、将所述微生物聚集体取出，置于蒸馏水中清洗两次，得到洁净微生物聚集体；将所述洁净微生物聚集体置于10ml水中形成洁净微生物聚集体混合液；

a5、吸取洁净微生物聚集体混合液，制成玻片，利用数码显微镜获取玻片图像，记录所述玻片图像中微生物聚集体所在区域的R值、G值和B值，并由所述R值、G值和B值计算得到所述微生物聚集体的灰度值；

a6、重复a3-a5，直到获得30组微生物聚集体的比重值和灰度值；采用最小二乘法处理所述30组微生物聚集体的比重值和灰度值，获取待测微生物聚集体样本的灰度值与比重值标准关系曲线；

b、以面积和比重值作为两项评价指标，按如下步骤计算待测微生物聚集体样本的评价指标值x_ij；

其中i为评价指标类型，i=1，2；j为待测微生物聚集体编号，j=1，2，…，n；

当i=1时，x_1j为第j个待测微生物聚集体的面积；

当i=2时，x_2j为第j个待测微生物聚集体比重值；

b1、取含有待测微生物聚集体的混合液制成待测玻片，利用数码显微镜获取待测玻片图像；将所述待测玻片图像的羽化值固定为10，选取所述待测玻片图像中所有的待测微生物聚集体，并从1到n对所有待测微生物聚集体进行编号，n=1，2，3……；记录n个待测微生物聚集体的分辨率、R值、G值和B值；

b2、根据b1所得的分辨率、R值、G值和B值，逐一计算n个待测微生物聚集体的灰度值和面积x_1j；

b3、利用步骤a获得的灰度值与比重值标准关系曲线和步骤b2获得的灰度值，分别获取n个待测微生物聚集体的比重值x_2j；