[发明专利]一种从远志中制备3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种从远志中制备高纯度3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的方法。

背景技术

3,6’-二芥子酰基蔗糖酯（3,6’-disinapoylsucrose, DISS）是一种酰化寡糖，分子式：C₃₄H₄₂O₁₉，分子量：754.23，淡黄色无定形粉末。分子结构式如下：

3,6’-二芥子酰基蔗糖酯具有明确的抗抑郁作用，能明显改善抑郁模型小鼠行为学指标，可增强5-HT 系统功能，并能够保护受损的神经细胞，对慢性应激大鼠HPA轴激素水平具有调节作用，增加抑郁动物海马中磷酸化CREB表达，并提高CREB下游靶基因BDNF的mRNA及蛋白的表达。

3,6’-二芥子酰基蔗糖酯主要来源于远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志Polygala sibirica L.的干燥根，药材中3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的含量为0.50%以上。

糖酯类为远志药材的重要指标成分，2010版《中华人民共和国药典》远志项下增加了3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的含量测定，作为药材质量评价指标。近年来的研究表明，以3,6’-二芥子酰基蔗糖酯为代表的远志糖酯类成分具有抗抑郁、抗老年痴呆、脑神经保护等显著的药理学活性，具有潜在的新药开发前景，日益受到国内外学者关注。

目前，尚无制备高纯度的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的专利报道。2010年潘瑞乐等^[1]公开发表了“高速逆流色谱分离纯化远志中3,6’-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A”一文，采用制备型高速逆流色谱分离（HSCCC）法，以乙酸乙酯-正丁醇-水（4：l：5）为溶剂系统分离纯化制备3,6’-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A。该法使用了高沸点溶剂正丁醇，在后处理过程中需要较高温度回收溶剂，而3,6’-二芥子酰基蔗糖酯类于结构中含有酯键、糖苷键及共轭体系，易受酸碱、高温和光照的影响而发生结构变化^[2]。该方法从500g远志药材中仅分离得到24.6mg纯度为93％的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯，收率较低（小于1%）、成本高。据调研，目前市售的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯对照品的纯度大多在90%左右，无法满足科研及新药研发需求。

发明内容

本发明提供一种高纯度3,6’-二芥子酰基蔗糖酯制备方法，通过以下步骤实现：

(1)   提取：以远志药材为原料，加入水、乙醇或它们的混合溶剂进行提取；

(2)   富集：将步骤（1）所得提取物加入大孔吸附树脂，采用不同浓度乙醇梯度洗脱，富集3,6’-二芥子酰基蔗糖酯；

(3)   纯化：将步骤（2）富集得到的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯用反相中压层析进行纯化，以乙醇-乙腈-水溶液为洗脱溶剂进行洗脱，合并相同流分，50℃以下避光减压浓缩至干即得3,6’-二芥子酰基蔗糖酯。

具体的，所述步骤（1）为以远志药材为原料，加入水、乙醇或它们的混合溶剂作为提取溶剂，药材与提取溶剂质量体积比为1：4~1：20（kg/L），采用加热、超声或渗漉提取方式，提取2-3次，合并提取液，50℃以下避光减压浓缩至干。

具体的，所述步骤（2）为将步骤（1）所得提取物加水分散后，经4000r/min离心30min，取上清液加入大孔吸附树脂，依次用体积分数为0%、30%、50%的乙醇溶液进行洗脱，合并含3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的流分，50℃以下避光减压浓缩至干。药材与树脂用质量体积比为1：1~1：2（kg/L）。

具体的，所述步骤（3）为以乙醇-乙腈-水混合溶液为洗脱溶剂（混合溶液中有机相的体积分数为15%~20%；有机相中乙醇与乙腈的体积比为3：1），将步骤（2）富集得到的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯，加洗脱溶剂溶解后，经4000r/min离心30min，加入C18反相中压层析柱进行纯化，合并相同流分，50℃以下避光减压浓缩至干即得3,6’-二芥子酰基蔗糖酯。

优选的：所述步骤（1）为以远志药材为原料，加入10倍量体积分数为60%的乙醇溶液，回流提取2次，每次2小时，滤过，合并提取液，50℃避光减压浓缩至干。