[发明专利]一种生产青蒿二烯的酵母菌及构建方法

权利要求书

1.一种青蒿二烯合酶基因，其特征是它是序列表SEQ ID NO:9所述的核苷酸序列。

2.权利要求1的一种青蒿二烯合酶基因编码的蛋白质，其特征是它是序列表SEQ ID NO:10所述的氨基酸序列。

3.一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：

（1）载体SyBE_001317的构建：

将酵母启动子、ERG20基因、酵母终止子应用酶切连接的方法依次连入整合型载体，得到载体SyBE_001317；

（2）载体SyBE_001318的构建：

将酵母启动子、tHMGR基因、酵母终止子应用酶切连接的方法依次连入整合型载体，得到载体SyBE_001318；

（3）载体SyBE_001338的构建：

将酵母启动子、ERG20基因、融合蛋白连接肽、青蒿二烯合酶基因、酵母终止子与附加型载体采用酵母体内组装的方法拼接起来，得到载体SyBE_001338；

所述ERG20基因是序列表SEQ ID NO:3所述的核苷酸序列；

所述tHMGR基因是序列表SEQ ID NO:7所述的核苷酸序列；

所述青蒿二烯合酶基因是序列表SEQ ID NO:9所述的核苷酸序列；

（4）将所述载体SyBE_001317、SyBE_001318和SyBE_001338导入到酿酒酵母W303a或W303α中，得到生产青蒿二烯的酵母菌。

4.根据权利要求3所述的一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法，其特征是所述酵母启动子为TDH3p、PGK1p、TDH1p、TEF1p、ADH1p、PGI1p、TDH2p、HXT2p、HXT7p、TEF2p、PYK1p、ENO2p、PDC1p、FBA1p、GPM1p、TPI1p、GAL1p或GAL10p。

5.根据权利要求3所述的一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法，其特征是所述酵母终止子为PGK1t、CYC1t、TDH3t、TDH1t、TEF1t、ADH1t、PGI1t、TDH2t、HXT7t、HXT7t、TEF2t、PYK1t、ENO2t、PDC1t、FBA1t、GPM1t或TPI1t。

6.根据权利要求3所述的一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法，其特征是所述整合型载体为pRS403或pRS304。

7.根据权利要求3所述的一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法，其特征是所述融合蛋白连接肽为GGGS、GSG、GSGGGGS、GSGEAAAK、GSGEAAAKEAAAK或GSGMGSSSN。

8.根据权利要求3所述的一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法，其特征是所述附加型载体为pRS425、pYES2.0或pRS426。

9.权利要求3-8之一的一种生产青蒿二烯的酵母菌的构建方法构建的酵母菌。