[发明专利]一种重组人干扰素β-1b冻干制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种重组人干扰素β-1b冻干制剂，其特征在于，所述制剂含有浓度为0.1～0.5mg/mL的干扰素β-1b，1%～3%的人血白蛋白，该冻干制剂用磷酸盐缓冲液配制，所述制剂缓冲体系浓度范围为10～30mM，pH范围为6.5-8.0。

2.权利要求1的冻干制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

a、通过大肠杆菌发酵，发酵液经提取分离、变性复性、精细纯化等工艺得到重组人β-1b干扰素溶液；

b、将纯化得到的重组人β-1b干扰素溶液去除SDS，得到干扰素制剂原液；

c、将重组人β-1b干扰素制剂原液，按一定的比例加入稳定剂，定溶至一定的体积后制成半成品；

d、半成品进行无菌过滤分装，冻干得到其冻干制剂。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤a中所述重组人β-1b干扰素溶液，是由大肠杆菌表达，经纯化之后得到的蛋白溶液，所述干扰素溶液的缓冲体系为pH7.0-7.4、浓度为10～100mM磷酸盐缓冲液，其中含有0.1%的SDS、浓度为3-5mg/mL的重组人β-1b干扰素。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤b中所述去除β-1b溶液体系中的SDS方法，选自下列之一：透析、超滤、SEC色谱脱盐法，优选SEC色谱脱盐及超滤法。

5.如权利要求4所述的制备方法，其中所述超滤方法中，超滤膜的截留分子量选自下列之一：5KD，10KD，20KD，30KD或50KD，超滤换液过程，膜的平衡体系为浓度为10～100mM、pH11.5的NaOH，并进行至少5倍体系洗滤。

6.如权利要求4所述的制备方法，其中所述SEC色谱脱盐所使用的介质选自下列之一：Sephacryl S200，S100，Sephadex G75，G50，Sephadex G-25，SEC色谱脱盐流动相为1～10mM的NaOH pH11.0～11.5。

7.如权利要求6所述的制备方法，其中所述SEC色谱脱盐所使用的介质优选Sephadex G-25，SEC色谱脱盐流动相优选2.5mM pH11.5的NaOH。

8.如权利要求6或7任一所述的制备方法，其中选用Sephadex G-25介质进行SEC色谱脱盐时，清洗标准操作方法为：（1）上样管、buffer管和柱尾收集管路均浸泡在0.5MNaOH中；（2）色谱柱经0.5M NaOH处理时间大于10h，处理体积大于8L；（3）样管和buffer管路用注射用水冲洗至中性；（4）色谱柱用注射用水冲洗至中性。

9.如权利要求6或7任一所述的制备方法，其中选用Sephadex G-25介质进行SEC色谱脱盐时，上样前平衡至少2个柱体积，样品上样浓度为2.0-2.5mg/mL，上样体积为0.5-1%。

10.如权利要求6或7任一所述的制备方法，其中选用Sephadex G-25介质进行SEC色谱脱盐时，其样品收集方式为UV280起峰5mAu～峰尾5mAu，收集样品混合均匀用0.22μm膜过滤除菌。

11.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤c所述的稳定剂为人血白蛋白，半成品的配置过程为，在干扰素制剂原液中，加入一定比例的人血白蛋白和磷酸盐缓冲液，使半成品缓冲体系浓度范围为10～30mM，pH为6.5～8.0，干扰素β-1b浓度为0.1～0.5mg/mL，白蛋白含量为1%～3%。

12.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤d冻干方法为真空冷冻干燥；制剂冷冻干燥前进行0.22μm滤膜过滤除菌、分装至2ml西林瓶，分装规格为1.1mL/瓶。

13.如权利要求12所述的制备方法，其特征在于，整个冻干过程是在搁架温度保持在－40℃～30℃下进行的；所述冻干方法为－40℃预冻2～3小时，抽真空，保持4～6小时，然后在保持真空下升温，每小时升高5～10℃，温度升高到30℃后，保持温度与真空3～5小时，最后，通入氮气，进行容器封口。