[发明专利]一种鸡新城疫二联体疫苗及其制备方法无效
| 申请号： | 201310453688.4 | 申请日： | 2013-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN103495182A | 公开（公告）日： | 2014-01-08 |
| 发明（设计）人： | 郭芳茹;杨慧敏;张遂平;杨果;王菊萍;董战杰;王黎明 | 申请（专利权）人： | 河南亚卫动物药业有限公司 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61K39/17;A61P31/14;A61K38/21 |
| 代理公司： | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 田小伍 |
| 地址： | 451162 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新城 二联体 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种预防鸡新城疫疾病的二联体疫苗，其特征在于，该疫苗通过以下方法制得：
（1）利用PCR技术扩增鸡α干扰素基因，利用RT-PCR技术扩增鸡新城疫病毒HN基因；
（2）将步骤（1）获得的HN基因和鸡α干扰素基因克隆到真核表达载体质粒pcDNA3.1中，构建重组真核双表达载体质粒pcDNA3.1-IFN-HN；
（3）将步骤（2）获得的重组真核双表达载体质粒pcDNA3.1-IFN-HN转染BHK-21细胞进行ZeocinTM抗性筛选；
（4）将步骤（3）筛选所得阳性细胞进行培养，使HN基因和鸡α干扰素基因得到充分表达；
（5）将步骤（4）HN基因和鸡α干扰素基因所表达蛋白回收纯化获得目的蛋白；
（6）将步骤（5）所获得的目的蛋白与佐剂混合制备预防鸡新城疫疾病的二联体疫苗。
2. 如权利要求1所述预防鸡新城疫疾病的二联体疫苗，其特征在于，步骤（6）中所述目的蛋白与佐剂壳聚糖的质量比为1∶1。
3.权利要求1所述预防鸡新城疫疾病的二联体疫苗的制备方法，包括以下步骤：
（1）利用PCR技术扩增鸡α干扰素基因，利用RT-PCR技术扩增鸡新城疫病毒HN基因；
（2）将步骤（1）获得的HN基因和鸡α干扰素基因克隆到真核表达载体质粒pcDNA3.1中，构建重组真核双表达载体质粒pcDNA3.1-IFN-HN；
（3）将步骤（2）获得的重组真核双表达载体质粒pcDNA3.1-IFN-HN转染BHK-21细胞进行ZeocinTM抗性筛选；
（4）将步骤（3）筛选所得阳性细胞进行培养，使HN基因和鸡α干扰素基因得到充分表达；
（5）将步骤（4）HN基因和鸡α干扰素基因所表达蛋白回收纯化获得目的蛋白；
（6）将步骤（5）所获得的目的蛋白与佐剂混合制备预防鸡新城疫疾病的二联体疫苗。
4.如权利要求3所述预防鸡新城疫疾病的二联体疫苗的制备方法，其特征在于，步骤（6）中所述目的蛋白与佐剂壳聚糖的质量比为1∶1。
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