[发明专利]检测人XPD基因热点突变位点的方法、引物和试剂盒

权利要求书

1.用于检测检测人XPD基因热点突变位点的引物，所述引物包括：

(1)一对用于扩增人XPD基因第23外显子的特异性外侧引物SEQ NO1和SEQ NO2，其碱基序列为：

SEQ NO1：TCTGGATTATACGGACATCTC；

SEQ NO2：Biotin-TCACCTGACTTCATAAGACCT

(2) 一条特异性内侧测序引物SEQ NO3，其碱基序列为：

SEQ NO3：GCTAGAATCAGAGGAGACG.。

2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述突变位点为Lys751Gln。

3.一种用于检测检测人XPD基因热点突变位点的方法，所述方法包括：

（i）提取样品中的DNA；

（ii）利用一对特异性外侧扩增引物SEQ NO1和SEQ NO 2，进行PCR扩增，获得扩增产物，其中SEQ NO1：TCTGGATTATACGGACATCTC；SEQ NO2：Biotin-TCACCTGACTTCATAAGACCT；

（iii）将（ii）中的扩增产物进行电泳鉴定，确定是否扩增成功；

（iv）若扩增成功，利用一条特异性内侧测序引物SEQ NO3对所述扩增产物进行焦磷酸测序，获得所述扩增产物的基因序列，其中 SEQ NO3：GCTAGAATCAGAGGAGACG.；

（v）将所述基因序列与人XPD基因第23外显子野生型基因序列进行比对，判断是否存在热点突变位点。

4.如权利要求3所述的方法，步骤(ii)的PCR扩增反应条件为94℃ 5min；98℃ 30s、 58℃ 30s、68℃ 30s，35个循环；最后68℃ 5min。

5.一种用于检测人XPD基因热点突变位点的试剂盒，包括血液DNA抽提试剂、无水乙醇、PCR扩增反应液、阳性对照品、阴性对照品和空白对照品以及焦磷酸测序反应液，其特征在于：所述PCR扩增反应液包括一对用于扩增人XPD基因第23外显子的外侧特异性扩增引物SEQ NO1和SEQ NO2，其碱基序列为：

SEQ NO1：TCTGGATTATACGGACATCTC；

SEQ NO2：Biotin-TCACCTGACTTCATAAGACCT

所述焦磷酸测序反应液包括一条内侧特异性测序引物SEQ NO3，其碱基序列为：

SEQ NO3：GCTAGAATCAGAGGAGACG.。

6.如权利要求5所述的试剂盒，所述PCR扩增反应液还包括2*PCR Buffer、dNTPs、KOD FX DNA Polymerase和ddH₂O。

7.如权利要求5所述的试剂盒，所述阳性对照品为含有人XPD基因纯合突变样本DNA的溶液，所述阴性对照品ddH₂O，所述空白对照品为生理盐水或不加任何物质。