[发明专利]一种皱纹盘鲍高纯度基因组DNA样本的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物样本的提取方法，具体涉及一种皱纹盘鮑高纯度基因组DNA样本的提取方法。

背景技术

皱纹盘鲍是名贵的海产贝类，被尊为“海产八珍”之首。因经济价值较高，我国皱纹盘鲍增养殖业不断扩大，养殖技术手段也在不断进步。近年来，分子标记辅助育种技术也被引入皱纹盘鲍遗传育种上。

分子标记辅助育种主要是通过标记开发、关联分析、基因等位等方式获取代表优良生产性状的DNA序列标记，以这些标记为指针，快速筛选优良亲本，指导生产实践。分子标记分析的前提是获取高纯度的全基因组DNA，由于皱纹盘鲍的价格较高，且少量组织就能满足一般实验分析的需求，因此杀死个体的取样方式明显浪费。在繁育后代之前要完成亲本个体的分子标记特征分析，这是分子标记辅助育种工作顺利完成的先决条件。因此有必要采用活体组织取样方式来获取高纯度的基因组DNA，进而完成个体的分子标记特征分析。

已有报道采用刮擦腹足等方式获取皱纹盘鲍全基因组DNA样本的方式，该方式虽然不对皱纹盘鲍个体造成伤害，但是该方式获取的样本量较少，且容易产生外源基因的干扰。

发明内容

为解决目前在提取皱纹盘鲍高纯度基因组DNA 样本时样本量少、且容易受到外源基因干扰的技术问题，本发明提供一种微创条件下的皱纹盘鲍活体组织DNA样本的获取方法。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案为：

一种皱纹盘鮑高纯度基因组DNA样本的提取方法，其特征在于，该提取方法的步骤为：将取样皱纹盘鲍在含有1-2%的复方新诺明的12-16℃过滤海水中培育24小时，期间不投喂任何饵料，暂养结束后，使用清洁的海水清洗皱纹盘鲍上足突出的肉刺部位3-4遍，冲洗掉该部位的外源附着物，之后用消毒剪在上足突出的肉刺部位剪取若干块直径约0.1-0.3cm的肉刺组织作为DNA提取样本；取样后，采用10ppm的土霉素对皱纹盘鲍受伤部位进行擦拭，然后将取样后的皱纹盘鲍放入前述的暂养海水中，再次暂养24小时，期间不投喂任何饵料，暂养结束后将取样对象进行常规养殖；所取得的DNA提取样本可以直接进行提取基因组DNA操作，或者将样本放入80%的酒精中固定，24小时后将保存液换成纯酒精，进行长期保存。

上述用于对皱纹盘鲍上足突出肉刺部位清洗的海水经过0.2μm GF/F过滤。

本方法的优点是：在微创条件下完成皱纹盘鲍高纯度基因组DNA样本的提取，基本不会对皱纹盘鲍造成伤害。该取样方法可以避免外源基因的影响，保证样本能够提取出高纯度的基因组DNA。取样后，鲍个体可以继续生长发育，并且繁育子代。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

高纯度皱纹盘鲍基因组DNA的微创提取步骤包括：首先对待取样皱纹盘鲍进行暂养处理，海水温度12-16℃，水中含有1-2%复方新诺明，时间为24小时，暂养期间不投喂任何饵料，用以降低其新陈代谢速率并防止细菌感染。暂养结束后，将皱纹盘鲍取样个体平放在实验台上，用经过GF/F（0.2μm）过滤后的海水进行冲洗，尤其对皱纹盘鲍上足突出的肉刺部分反复冲洗3-4遍，然后用消毒的眼科剪在上足的前部及后部的左右两侧突出的肉刺部位各剪取一块直径约0.1-0.3cm的肉刺组织作为DNA提取样本；剪取后，用10ppm的土霉素对4个剪取部位进行消毒。取样后的皱纹盘鲍再次放入前述的暂养海水中进行暂养24小时，期间不投喂任何饵料。暂养结束后将取样对象进行常规养殖；所取得的DNA提取样本可以直接进行提取基因组DNA操作，或者将样本放入80%的酒精中固定，24小时后将保存液换成纯酒精，进行长期保存。

微创取样后的皱纹盘鲍个体存活情况实验结果：