[发明专利]一种以酸化处理法测定微生物培养体系中钴含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于测定钴含量的方法，涉及一种以酸化处理法测定微生物培养体系中钴含量的方法。特别适用于浓硝酸硝化法测定LB (即Luria-Bertani) 或NA (即Nutrient Agar) 培养基中钴离子含量的方法。 

背景技术

钴在土壤、水、空气及动植物等环境中广泛存在。钴是人体和植物所必须的微量元素之一。在人体内钴主要通过形成维生素B₁₂发挥生物学作用及生理功能，此外钴对铁的代谢、血红蛋白合成和细胞发育等均有重要生理功能。

天然水中钴含量很低，浓度多数为0.01～1.00mg/L，这样的浓度对人动植物不会产生毒害作用。有色金属冶炼厂和加工厂等企业的废水中常含高浓度的钴，例如：铅锌加工厂废水钴的浓度可达0.5～1.0mg/L，制备次氯酸盐的工厂废水钴浓度可达1.3mg/L。水中钴的浓度为0.1～0.27mg/L 时，对西红柿等植物产生毒害作用，硫酸钴浓度为2.0mg/L可使农作物生长减缓，甚至枯萎。研究钴污染环境的修复技术一直未间断过，而微生物活体修复技术以其投资小、运行费用低、 无二次污染等优点引起了广泛关注。因此，找到一种简便又快捷的测定微生物培养体系中钴离子含量的方法,具有重要意义。

现有技术中，检测钴的方法主要有分光光度法、原子吸收光谱法、极谱法、高效液相色谱法、化学发光法、电感耦合等离子体发射光谱法、电感耦合等离子体质谱法等，其中分光光度法具有设备简单、操作方便、价格低廉且准确度和精密度都较高等优点，被广泛使用。

现有技术中，微生物有4种常用培养体系：LB (即Luria-Bertani)培养基、NA(即Nutrient Agar)培养基、淀粉酪素培养基和查氏培养基。研究发现：LB培养基和NA培养基会显著干扰钴离子的测定，影响率分别达24.20%和8.47% 。采用现有技术方式难以实现微生物培养基中钴含量的准确测定。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术中的不足，提供一种以酸化处理法测定微生物培养体系中钴含量的方法。本发明通过浓硝酸酸化样品以消除微生物常用培养基对钴测定的显著影响，实现微生物培养体系中钴的准确测定。

本发明的内容是：一种以酸化处理法测定微生物培养体系中钴含量的方法，其特征是包括下列步骤：

a、浓硝酸酸化处理待测样品：取0.5～3.5mL的待测样品置于开口容器（例如：小烧杯）中，按1：1的体积比加入质量百分比浓度为65%～68%的浓硝酸，振荡混匀，得混合液；

所述待测样品是微生物培养体系中含有钴离子的待测溶液； 

b、将混合液置于备有石棉网的电炉上加热至沸腾，一边振荡一边驱酸，直到蒸发至近干（混合液中的水蒸发99%以上），再加入1.0～5.0mL纯水溶解，得水溶液；

c、将水溶液无损失的转移到10mL容量瓶中，最后用纯水定容至刻度线； 

d、采用分光光度法或/和原子吸收光谱法测定容量瓶中水溶液中的钴含量：

（1）采用分光光度法的测定方法是：取1.0mL容量瓶中水溶液于25mL比色管中，然后分别加入8.0mL柠檬酸铵-氨水缓冲液和3.0mL苦氨酸偶氮变色酸，用纯水定容至刻度线；摇匀静置15min，于464nm测定吸光度，根据标准曲线即可求得相应浓度；

步骤a中所述待测溶液（pH约为7）经预处理（即上述步骤a、b和c）后，其pH降低至2左右，而钴离子的络合显色是在一定的缓冲液中（pH=10.2）进行的，这必然会影响测定；研究发现通过调节预处理后溶液的pH并不能消除这种影响，而控制缓冲液的用量则可解决；因此曾选用了5.0mL、6.0mL、7.0mL、8.0mL、9.0mL 、10.0mL、11.0mL、12.0mL、13.0mL、14.0mL和15.0mL的缓冲液对预处理后的待测液进行测定，以缓冲液体积（mL）为横坐标，钴离子吸光度A为纵坐标，结果如附图1;从图1中可知，缓冲液用量在8.0～10.0mL范围内，钴离子的吸光度基本保持稳定；因此本方法选用8.0mL缓冲液。

（2）原子吸收光谱法：可采用AA700型原子吸收光谱仪测定。

本发明的内容中：步骤a中所述微生物培养体系是LB (即Luria-Bertani) 或NA (即Nutrient Agar) 培养基；