[发明专利]一种霍山石斛种苗无激素快速培养方法

权利要求书

1.一种霍山石斛种苗无激素快速培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）原球茎培养

    ①选择外植体 

    从霍山采摘生长100天左右尚未完全成熟的霍山石斛果荚，先用1%的洗洁精浸泡10-15min，然后用流水刷洗干净；

    ②灭菌 

    将洗净的果荚放入超净工作台无菌烧杯中，先用75%的酒精浸泡30-60s，无菌水冲洗1次，再用5%的次氯酸钠溶液浸泡20-30min，无菌水冲洗2-3次；

③接种培养 

严格无菌操作，解剖刀沿果荚纵向切开，乳白色粉末状的幼胚直接接种在1号培养基:营养元素母液100ml/L+山芋泥100g/L+麸皮糊10g/L+白糖10g/L+琼脂8g/L，幼胚在培养基的表面分散均匀，密而不成团，一个果荚可以接种4瓶；

培养条件：室内温度24-28℃，第一周暗培养，以后每天自然光照，培养10天，幼胚变成乳黄色开始胀大，培养20天发育成黄绿色的颗粒状，培养30天顶端长出很小的绿色的叶原基，培养45天发育成基部有丝状物翠绿的原球茎；

（2）分化叶培养  

在超净工作台的无菌区，接种铲从母瓶取出原球茎（不要铲到培养基）接入2号培养基：营养元素母液100ml/L+山芋泥100g/L+麸皮糊10g/L +白糖20g/L +琼脂8g/L中培养分化芽，1个母瓶可以接种5-6瓶，每瓶接种1铲，原球茎在培养基的表面分散均匀，彼此间距2mm；

培养条件：室内温度24-28℃，自然光照，培养15天长出第一片叶，培养30天长出第二片叶，培养45天长成高1.0-1.5cm健壮翠绿的小苗；

（3）继代培养  

用无菌圆头镊子轻轻取出小苗接入3号培养基:营养元素母液100ml/L+山

芋泥50g/L+麸皮糊10g/L+香蕉皮匀浆液100g/L+白糖10g/L+琼脂8g/L，1个母瓶可以接种9-10瓶，小芽在培养基的表面分散均匀，彼此间距5mm，培养条件同上，培养45天左右，长成苗高2-2.5cm、3-4片叶、2个节的大苗；   

（4）分化根培养 

从母瓶里取出大苗先放在培养皿中，轻轻剔除基部附着的培养基并分散开，接入4号培养基:营养元素母液50ml/L+山芋泥50g/L+麸皮糊10g/L+香蕉皮匀浆液80g/L+白糖10g/L+琼脂8g/L，进行生根培养，250 ml三角瓶接种20-22棵，650 ml组培瓶接种25-26棵，每棵间距1 cm，轻按苗基部接触培养基即可；每个母瓶可以接种12-15瓶；培养条件同上，培养12天就有根萌发，培养50天左右，生长成健壮的完整植株，生根率为100%，每棵苗高3-3.5cm，6-8片叶， 3-5条根，根长2-3cm，根粗壮；

（5）炼苗与移栽

①炼苗

选取苗高3-4cm，具有6-8片叶、3-5条根的健壮试管苗，打开封口膜，在温度20-30℃室内自然光下炼苗5-7天；

②移栽

取出试管苗，洗净根部附着的培养基，将根部浸入0.5%KMnO₄溶液中浸泡4-6min，取出等根表面水分晾干；

栽培基质为：水苔、小石子、栗粉，栽培容器小塑料杯，水苔用1%KMnO₄溶液浸泡20-30min后用洗衣机甩干，石子提前用水浸泡3-5h；

1-2棵石斛为一簇将根捋顺，用一小缕水苔将其根部包裹，水苔以此为中心缠绕，每缠绕1.5cm包裹进1-2棵石斛，茎基部不能包裹，松紧适中，包裹的大小与小塑料杯直径相当，放进塑料杯前杯底部先放少许的栗粉，上面用已浸泡好的小石子固定，放入室内，保持环境温度为20-30℃，自然光照射，第一周不能浇水，每天用喷雾器喷雾2-3次，前两周保持湿度为60-70%，以后逐渐降低湿度、每周浇水一次、一次性浇透，一个月后统计苗的成活率。

2.根据权利要求1所述的一种霍山石斛种苗无激素快速培养方法，其特征在于，所述营养元素母液的制备方法如下：称取10-12g硝酸钾、8-10g硝酸钙、1.5-2g磷酸二氢钾、 2-2.5g硫酸镁，先分别用少量超纯水充分溶解后混合，然后用1000ml容量瓶定容即可。