[发明专利]一种吡拉西坦脑蛋白水解物片中的脑蛋白水解物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种吡拉西坦脑蛋白水解物片中的脑蛋白水解物及其制备方法，具体地说，涉及一种由从除人以外的哺乳动物脑组织中提取的含有多肽以及包括游离氨基酸和游离谷氨酸在内的多种氨基酸的脑蛋白水解物，以及该脑蛋白水解物的制备方法，属于生物制剂领域。

背景技术

脑组织含有丰富的蛋白质，长期以来人们一直研究把动物脑组织中的蛋白质水解成氨基酸和低分子肽，用来治疗脑血管代偿不足所致的功能失调、中风、脑记忆障碍和脑外伤引起的功能紊乱、脑震荡后遗症等疾病。

脑蛋白水解物就是一种由动物脑组织经蛋白酶水解后得到的富含多种氨基酸和小分子多肽的混合物，由于含有大量人脑必须的氨基酸和多种神经生长的活性肽，可以调节和改进神经元的代谢，临床上，脑蛋白水解物主要用于治疗颅脑损伤和脑血管病（如脑梗和脑出血等）后遗症的恢复治疗，加速脑部神经系统的功能恢复。

其中以奥地利Ebewe制药厂研究的脑活素临床应用得较广泛。早于20世纪90年代初，国内学者便对其工艺、质量、药理药效及临床应用进行了研究，发表了大量的文章。

如申请号为94104516.1的中国专利申请公开了一种脑蛋白水解物的制备方法，采用匀浆、脱脂、风干、酶解、超滤、离子交换等步骤，该方法中风干步骤会造成多肽等物质的流失；申请号为01130523.1、200510064567.6、200710055421.4等中国专利申请公开了脑蛋白水解物的新的制备方法，上述方法中都存在使得氨基酸大量流失的步骤，因此，上述方法制得商榷；申请号为200610065169.0在制备脑蛋白水解物的过程中，加入了外源氨基酸，这也是目前临床应用的脑蛋白水解物药物的基本情况，说明现有方法需要进一步改进；申请号为200410022091.5的中国专利公开了一种脑蛋白水解物制剂的制备方法，该方法是直接将脑组织匀浆液进行蛋白酶水解，并通过进一步加工得到脑蛋白水解物，这种工艺的缺点就是，在脑组织匀浆液中含有大量脂肪，影响蛋白酶的水解效果，制备效率低，同时，较多的脂肪类物质会混在最后的脑蛋白水解物中，影响最终药品的外观和稳定性。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明提供一种吡拉西坦脑蛋白水解物片中的脑蛋白水解物。本发明所提供的脑蛋白水解物中不仅大分子物质含量低，游离脂肪酸含量低，且游离氨基酸含量高，生物活性高。

同时，本发明还提供所述的脑蛋白水解物的制备方法，其制备方法操作简单，适用于工业化大生产，并且产率高，可使企业获得较高的经济效益。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种吡拉西坦脑蛋白水解物片中的脑蛋白水解物，其中，所述的脑蛋白水解物是采用如下方法制备得到的：

1）取除人以外的哺乳动物的脑组织，自然缓化至无冰渣，剔除杂质，得到干净的脑组织；

2）取干净的脑组织进行匀浆，每次匀浆2～3分钟，得到脑组织匀浆液；

3）向脑组织匀浆液中加入2.5～3.5倍体积的丙酮，搅拌25～35分钟，静置3.5～4.5小时，过滤，得丙酮渣；再向丙酮渣中加入1.5～2.5倍体积的丙酮，搅拌25～35分钟，静置3.5～4.5小时，过滤，滤渣在60～70℃下干燥3～5小时，得到脑蛋白粉；

4）取胰蛋白酶、无水氯化钙用冷纯化水溶解，配制成浓度为0.02%～0.04%g/ml的胰蛋白酶溶液，室温下放置1～2小时活化；胃蛋白酶用冷纯化水溶解，配制成浓度为0.02%～0.04%g/ml的胃蛋白酶溶液；

5）取脑蛋白粉，加入纯化水，搅拌均匀，加热至40～45℃，加入活化好的胰蛋白酶，搅拌均匀，控制温度在40～45℃之间酶解3.5～4.5小时后，再加入胃蛋白酶，搅拌均匀，控制温度在40～45℃之间酶解1.5～2.5小时，酶解结束，加热至85～95℃、保温25～35分钟，然后降温至20～30℃，得到酶解液；

6）将所得的酶解液用离心机离心15～25分钟，收集上清液，过滤得到澄清液体，控制澄清液体的pH值至5.0～7.0；

7）将所得澄清液体进行浓缩、干燥、粉碎过筛，得到脑蛋白水解物干粉。

作为本发明所述的脑蛋白水解物的第一种优选方案，步骤4）中所述的无水氯化钙用量为胰蛋白酶用量的12～13wt%。

作为本发明所述的脑蛋白水解物的第二种优选方案，步骤5）中加入的活化好的胰蛋白酶的量为步骤2）的干净的脑组织总重量的2～3wt%；加入的胃蛋白酶的量为步骤2）的干净的脑组织总重量的0.5～1wt%。