[发明专利]用干姜、穿山龙、鸡血藤制成的治疗风湿痹痛药的HPLC特征图谱的构建方法

权利要求书

1.用干姜、穿山龙、鸡血藤制成的治疗风湿痹痛药的HPLC特征图谱的构建方法，其特征是包括下述步骤：

（1）供试品溶液的制备：取骨骼风痛制剂10g，精密称定，加水50～100ml，充分搅拌，静止1～3小时后，离心，取上清液过滤，浓缩至20ml，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，80℃水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，用环己烷振摇提取3次，每次20ml，合并环己烷液，80℃水浴蒸干，用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

（2）对照品溶液的制备：精密称取芒柄花素、6-姜酚对照品各5mg置25ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

（3）药材溶液的制备：分别取鸡血藤药材、干姜药材各10g，粉碎，分别加水20～30ml，精密称定重量，超声提取20～30分钟，放冷，再精密称定重量，用水补足减失的重量，滤过，滤液用环己烷振摇提取3次，每次30ml，合并环己烷液，80℃水浴蒸干，甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

（4）阴性对照品溶液的制备：按照骨骼风痛片的工艺，分别制备缺少鸡血藤药材、干姜药材的阴性样品，分别取鸡血藤阴性样品、干姜阴性样品各10g，按供试品溶液制备方法制备，即得；

（5）色谱条件：色谱柱GraceSmart RP18(5μm,4.6mm×250mm)；流动相为乙腈和浓度为0.1%的磷酸水溶液的混合物，其中乙腈占流动相体积的30～35%：，等度洗脱；检测波长：280nm；柱温40℃；流速0.8ml/min。

（6）测定：分别精密吸取步骤（1）所得的供试品溶液和步骤（2）所得的对照品溶液、步骤（3）所得的药材溶液、步骤（4）所得的阴性对照溶液各20μl注入步骤（5）所限条件的液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得HPLC特征图谱。

2.根据权利要求1所述的由干姜、穿山龙、鸡血藤制成的治疗风湿痹痛制剂的HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：

（1）供试品溶液的制备:取骨骼风痛制剂10g，精密称定，加水100ml，充分搅拌，静置2小时后，离心，取上清液，滤过，浓缩至20ml，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，80℃水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，用环己烷振摇提取3次，每次20ml，合并环己烷液，80℃水浴蒸干，用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

（2）对照品溶液的制备：精密称取芒柄花素、6-姜酚对照品各5mg，分别置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液；

（3）药材溶液的制备：分别取鸡血藤药材、干姜药材各10g，粉碎，分别加水30ml，精密称定重量，超声提取20分钟，放冷，再精密称定重量，用水补足减失的重量，滤过，滤液用环己烷振摇提取3次，每次30ml，合并环己烷液，80℃水浴蒸干，甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

（4）阴性对照品溶液的制备：按照骨骼风痛片的工艺，分别制备缺少鸡血藤药材、干姜药材的阴性样品，分别取鸡血藤阴性样品、干姜阴性样品各10g，按供试品溶液制备方法制备，即得；

（5）色谱条件：色谱柱GraceSmart RP18(5μm,4.6mm×250mm)；流动相：乙腈和浓度为0.1%的磷酸水溶液的混合物，其中乙腈占流动相体积的32%：；检测波长：280nm；柱温40℃；流速0.8ml/min；

（6）测定：分别精密吸取步骤（1）所得的供试品溶液和步骤（2）所得的对照品溶液、步骤（3）所得的药材溶液、步骤（4）所得的阴性对照溶液各20μl注入步骤（5）所限条件的液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得HPLC特征图谱。