[发明专利]测定致畸风险的方法

权利要求书

1.评估化合物的致畸风险的非诊断方法，其包括：

(1)在可重复地在3天的分化中达到40-60％中内胚层形成的条件下，使所述化合物与正在向中内胚层分化的多潜能干细胞接触；

(2)在分化的第三天测量一个或多个中内胚层标记的蛋白质表达，所述一个或多个中内胚层标记选自Sox17、EOMES和T-brachyury；

(3)测定所述化合物的IC50浓度，其导致所述一个或多个标记的蛋白质表达的50％抑制；和

(4)将所述步骤(3)中测定的IC50浓度与(a)一种或多种已知具有致畸风险的化合物的IC50浓度和(b)一种或多种已知无致畸风险的化合物的IC50浓度相比较，以确定所评估的化合物的致畸风险，

其中所述中内胚层标记中的至少一个是SOX17。

2.权利要求1的方法，其中所述多潜能干细胞是灵长类来源。

3.权利要求1的方法，其中所述多潜能干细胞是多潜能的胚胎干细胞。

4.权利要求1的方法，其中所述多潜能干细胞是诱导的多潜能干细胞。

5.权利要求1的方法，其中所述中内胚层标记中的至少一个是EOMES。

6.权利要求1的方法，其中所述中内胚层标记中的至少一个是T-brachyury。

7.权利要求1的方法，其中SOX17的蛋白质表达是所测量的唯一的所述中内胚层标记。

8.权利要求1的方法，其中SOX17和EOMES的蛋白质表达是所测量的仅有的所述中内胚层标记。

9.权利要求1的方法，其中SOX17和T-brachyury的蛋白质表达是所测量的仅有的所述中内胚层标记。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中通过免疫组织化学测量所述蛋白质表达。

11.权利要求1-9中任一项的方法，其中通过流式细胞术测量所述蛋白质表达。

12.权利要求1-9中任一项的方法，其中通过荧光显微镜检术测量所述蛋白质表达。

13.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(4)中的所述一种或多种已知具有致畸风险的化合物选自放线菌素D、维甲酸、阿糖胞苷、诺考达唑、鱼藤酮、异维甲酸、溴脱氧尿苷、阿霉素、dorsomorphin、沙利度胺、5-氟尿嘧啶、达沙替尼、索拉非尼、丙戊酸、舒尼替尼、齐拉西酮、米安色林、凡德他尼、己烯雌酚、6-氨基-烟酰胺、利坦色林和吉非替尼。

14.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(4)中的所述一种或多种已知具有致畸风险的化合物选自沙利度胺、米安色林和利坦色林。

15.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(4)中的所述一种或多种已知无致畸风险的化合物选自埃索美拉唑、叶酸、儿茶素、稠环乙脲、烟酸、阿司匹林、布洛芬、阿昔洛韦、酮舍林、链霉素、甲基多巴、糖精、咖啡因、青霉素和替加色罗。

16.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(4)中的所述一种或多种已知无致畸风险的化合物选自叶酸和甲基多巴。

17.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(4)中的所述一种或多种已知具有致畸风险的化合物选自沙利度胺、米安色林和利坦色林；且所述一种或多种已知无致畸风险的化合物选自叶酸和甲基多巴。